Sistemele de restricție -modificare bacteriene [616438]

Sistemele de restricție -modificare bacteriene
 Endonucleazele atacă moleculele de ADN în interiorul acestora, unele dintre ele
acționând nespecific, în timp ce altele recunosc secvențe nucleotidice specifice
pentru a -și putea desfășura activitatea catalitică. Acestea din urmă se numesc
endonucleaze de restricție .

Primele trei litere indică genul și specia.
Sau – Staphyloccocus aureus.
Mbo – Moraxella bovi.

A patra literă, în format normal, indică tulpina bacteriană de proveniență.
EcoR – Escherichia coli, tulpina RY13.

O literă în format roman indică câte endonucleaze de restricție au fost izolate din
specia, respectiv tulpina bacteriană respectivă.
EcoRV – Escherichia coli , tulpina RY13, a 5 -a enzimă de restricție izolată din această
tulpină. Nomenclatura enzimelor de restricție – reguli de denumire

 Există 4 tipuri de sisteme de restricție -modificare: I, II, III și IV.
Modelul de acțiune al
endonucleazelor de tip I Sisteme de restricție -modificare de tip I

Secvențele de ADN sunt scindate în
funcție de starea în care se găsește
situsul de recunoaștere :
i. dacă el este metilat, enzima se leagă
la ADN, dar apoi este eliberată fără
manifestarea actului catalitic ;
ii. dacă este semimetilat, enzima va
metila și cealaltă catenă ;
iii. dacă este nemetilat, legarea enzimei
se va solda cu scindarea dublei catene .

Caracteristicile
primelor trei sisteme
de restricție –
modificare

Tehnica RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism )
 Mutația punctiformă modifică
situsul de recunoaștere al
endonucleazei BamH I astfel
încât aceasta nu își mai poate
exercita activitatea enzimatică.

Obținerea vectorilor
recombinați
Mecanismul de
acțiune al ADN
ligazei T4

Transfecția celulelor animale Transformarea celulelor procariote
Prin procesul de transformare, bacteriile încorporează molecule de ADN
libere, situate în afara celulelor (plasmide, vectori recombinanți, fragmente
de ADN etc.), menținând stabilă informația genetică conținută de acestea și
chiar exprimând -o.
i. Electroporarea.
ii. Fuziunea protoplastelor cu celulele
animale.
iii. Microinjecția .
iv. Injecția hidrodinamică .
v. Transducție indusă .
vi. Utilizarea n anostructuril or lipidice
vii. Transportul intracelular via polimeri
cationici.
viii. Transferul prin intermediul peptidelor
penetrante.
x. Utilizarea n anostructuril or ADN. Transfecția celulelor de drojdii

Transfecția celulelor vegetale Metoda electroporării

Bibliografie

Tehnici de biologie moleculară – principii și aplicații practice , Sergiu Emil Georgescu,
Andreea Dudu, Marieta Costache, 2016, Editura Universității din București,
București, România, ISBN 978-606-16-0729.

Paginile 63 (de la Sisteme de restricție -modificare bacteriene) – 75 (pana la
Trans fecția celulelor vegetale)