Disciplina de Reproducție, Obstetrică și Ginecologie Veterinară [615407]

UNIVERSITATEA DE ȘTIINȚE AGRICOLE ȘI MEDICINĂ VETERINARĂ
CLUJ -NAPOCA

FACULTATEA DE MEDICIN Ᾰ VETERINAR Ᾰ
Departamentul CLINIC
Disciplina de Reproducție, Obstetrică și Ginecologie Veterinară

Noémi – Blank a BENEDEK

LUCRARE DE LICENȚĂ

Înseminarea artifici ală prin metoda chirurgicală cu material seminal congelat la cățea

Îndrumă tor științific:
Conf . Dr. Raul Alexandru POP

Cluj -Napoca
2018

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

2

CUPRINS

REZUMAT ………………………….. ………………………….. ………………………….. ………………………….. …… 3
ABSTRACT ………………………….. ………………………….. ………………………….. ………………………….. …. 4
ABREVIERI ………………………….. ………………………….. ………………………….. ………………………….. …. 4
INTRODUCERE ………………………….. ………………………….. ………………………….. ……………………….. 5
PARTEA I – STADIUL ACTUAL AL CUNOAȘTERII ÎN DOMENIUL TEMEI
ABORDATE ………………………….. ………………………….. ………………………….. ………………………….. … 6
Capitolul 1 ………………………….. ………………………….. ………………………….. ………………………….. …… 7
FIZIOLOGIA CICL ULUI SEXUAL ………………………….. ………………………….. …………………….. 7
1.1 Momentul ovulației și hormonii implicați ………………………….. ………………………….. …………. 7
Capitolul 2 ………………………….. ………………………….. ………………………….. ………………………….. …. 10
METODE FOLOSITE PENTRU DEPISTAREA OVULAȚIEI ………………………….. ……….. 10
2.1 Frotiu citovaginal ………………………….. ………………………….. ………………………….. …………….. 10
2.2 Determinarea nivelului de progesteron plasmatic ………………………….. …………………………. 14
Capitolul 3 ………………………….. ………………………….. ………………………….. ………………………….. …. 16
MATERIALUL SEMINAL ………………………….. ………………………….. ………………………….. …….. 16
3.1 Caract eristicile materialului seminal ………………………….. ………………………….. ………………. 16
3.2 Conservarea materialului seminal prin congelare ………………………….. …………………………. 18
Capitolul 4 ………………………….. ………………………….. ………………………….. ………………………….. …. 21
MATERIALE ȘI METODE ………………………….. ………………………….. ………………………….. ……. 21
4.1. Examinarea materialului seminal după decongelare ………………………….. …………………….. 23
4.2 Considerații practice privind conservarea materialului seminal ………………………….. ………. 26
4.3 Tehnica înseminării artificiale prin metoda chirurgicală ………………………….. ………………… 27
Capitolul 5 ………………………….. ………………………….. ………………………….. ………………………….. …. 36
REZULTATE ȘI DISCUȚII ………………………….. ………………………….. ………………………….. …… 36
Capito lul 6 ………………………….. ………………………….. ………………………….. ………………………….. …. 40
CONCLUZII ȘI RECOMANDĂRI ………………………….. ………………………….. ……………………… 40
BIBLIOGRAFIE ………………………….. ………………………….. ………………………….. ……………………… 41

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

3
ÎNSEMINARE ARTIFICIALĂ PRIN METODA CHIRURGICALĂ CU MATERIAL
SEMINAL CONGELAT LA CĂȚEA

Autor: Noémi – Blanka Benedek
Îndrumător Științific: Conf . Dr. Raul Alexandru POP
Universitatea de Științe Agricole și Medicină Veterinară, Facultatea de Medicină Veterinară,
Calea Mănăștur nr. 3 -5, 400372, Cluj -Napoca, România
noemibenedek89@yahoo.ro

REZUMAT

Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală cu material seminal congelat este o
tehnică de reproducție modernă , practicată prima dată în România cu succes. Această metodă se
folosește în situațiile când monta naturală sau înseminarea artificială cu material seminal
proaspăt nu pot fi efectuate. Principalele motive utilizării acestei metode sunt : distanț a foarte
mare între fem elă și masculul donator , femela este la finalul perioadei reproductive sau proba de
material seminal este de o calitate mai scăzută din diferite motive (vȃrsta înaintată, fertilitate
scăzută , recoltări multiple ) însă masculul are o valoare genetică ridica tă.
Scopul studiului desfășurat în perioada noiembrie 2016 – iunie 2018, în cadrul Clinicii de
Reproducție, Obstetrică și Ginecologie Veterinară a Facultății de Medicină Veterinară Cluj,
constă în îmbunătățirea procesului reproductiv prin tehnica chirurgicală de înseminare artificială
cu material seminal congelat și urmărirea evoluția gestației, fătării și a numărului de produși
viabili rezultați în urma acesteia. Cercetările s -au efectuat pe un nu măr de 5 cățele cu vârsta
cuprinsă între 2.5 a ni și 5 ani, aparținând raselor diferite: Ogar Englez, Saint Bernard (două
female), Golden Retriever și Dobermann.
Conform rezultatelor 40% din numărul de femele înseminate prin această tehnică au
rămas gestant e și tot atâtea au dus gestația la un bun sfârșit.
În concluzie această metodă poate fi folosită cu succes atunci când femela este clinic
sănătoasă și are nivelul de progesteron corespunzător astfel încât să poate duce gestația până la
bun sfârșit, iar ma terialul seminal are o mobilitate totală de minim 50%, din care mobilitatea
progresivă să fie de minim 35 %.
Cuvinte cheie : înseminare artificială, metoda chirurgicală, material seminal
congelat

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

4
ARTIFICIAL INSEMINATION USING THE SURGICAL METHOD WITH FROZEN
SEMEN IN BITCHES

Author: Noémi – Blanka Benedek
Scientific Coordinator: Conf.Dr. Raul Alexandru POP
University of Agricultural Sciences and Veterinary Medicine, Faculty of Veterinary Medicine,
Calea Mănăștur nr. 3 -5, 400372, Cluj -Napoca, Romania
noemibenedek89@yahoo.ro

ABSTRACT

Artificial insemination by the surgical method with frozen semen is a modern breeding
technique, first practiced successfully in Romania. This method is used in situations when the
natural breeding or the artificial insemination with fresh semen can not be performed. The main
reasons for using this method are: the very long distance between the female and the donor male,
the female is at the end of the reproductive period or the sample of the semen has an inferior
quality for different reasons ( old age , low fertility, multiple harvesting) but the male still has a
high genetic value.
The purp ose of the study wich was done between November 2016 – June 2018 at the
Reproduction, Obst etrics and Gynecology Clinic of the Faculty of Veterinary Medicine, Cluj,
consists in improving the reproduct ive process by artificial insemination technique with frozen
semen and following the evolution of gestation, the number of viable products resultin g from it.
Research has been done on five bitches aged between 2.5 years and 5 years of different breeds:
Greyhound, Saint Bernard (two women), Golden Retriever and Dobermann.
According to the results, 40% of the bitches inseminated by this techniqu e have remai ned
pregnant and gave birth to a litter .
In conclusion, this method can be used successfully when the female is clinically healthy
and has the approp riate progesterone level to carry a gestation , and t he semen has a total mobility
at least 50%, of which the progressive mobility is minimum 35%.

Key words : artificial insemination, surgical method, frozen semen

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

5

INTRODUCERE

Cățeaua este un animal cu ciclu diestric, cu o durată a ciclului sexual de 3 -6 luni și
sezonieră (căldurile apar în general toamna și primăvara). Pubertatea la cățea se instalează la
vârsta de 6 -12 luni, iar perioada de reproducție durează până la 8 -10 ani. Ciclul sexual prezintă
numeroase particularități, durata sa variind cu rasa și în cadrul rasei, variază în funcție de
individ, vârstă (Groza I., 2006). Lucrarea de față are scopul de a îmbunătăți procesul reproductiv
prin tehnica chirurgicală de înseminare artificială cu material seminal congelat și urmărirea
evoluția gestației, fătării și a numărului de produși viabili rezul tați în urma acesteia.
Înseminarea artificială realizată cu material seminal congelat necesită inocularea acestuia
să se facă intrauterin și se aplică prin metoda chirurgicală. Metoda chirurgicală de înseminare
artificială este utilizat atunci când donator ul se află la o distanță foarte mare și femela este pe la
finalul perioadei reproductive. În acest studiu am urmărit rezultatele în urma înseminării
artificiale prin metoda chirurgicală la 5 cățele, pentru care din diverse motive s -a optat pentru
această t ehnică.
Studiul s -a derulat în perioada noiembrie 2016 – iunie 2018 în cadrul clinicii de
Reproducție, Obstetrică și Ginecologie Veterinară a Facultății de Medicină Veterinară,
Universitații de Științe Agricole și Medicină Veterinară Cluj -Napoca, sub îndru marea cadrului
didactic, Conf. Dr. Alexandru Raul Pop.

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

6

PARTEA I – STADIUL ACTUAL AL CUNOAȘTERII ÎN DOMENIUL TEMEI
ABORDATE

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

7
Capitolul 1
FIZIOLOGIA CICLULUI SEXUAL

Cățeaua este un animal cu c iclu diestric, cu o durată a ciclului sexual de 3-6 luni. În
general căldurile apar toamna și primăvara . Pubertatea la cățea se instalează la vârsta de 6 -12
luni, iar perioada de reproducție durează până la 8 -10 ani. Ciclul sexual prezintă numeroase
particularități, durata sa varii nd cu rasa și în cadrul rasei, variază în funcție de individ, vârstă, etc.
Cățelele au 2 -4 periode de călduri pe an și fiecare fază a ciclului sexual este mai lungă (Groza I.,
2006 ).
Ciclul sexual (fig. 1.1 .) se împarte în mai multe faze după cum urmează:
Proestru s : durează timp de 7-10 zile, în această perioadă apar scurgeri sangvinolente și
vulva se tumefiază progresiv ; în proestrul târziu avem peak -ul de estrogen;
Estru s : are o durată de 5 -10 zile, ovula ția are loc începȃnd cu ziua a doua; începe in ziua
când se produce prima descărcare de LH, și este marcată de creșterea progesteronului și scăderea
17β-estradiolului plasmatic;
Metestrus : avȃnd o durată de 20 -90 zile; nivelul de progesteron este în creș tere și la
examenul citologic cornificarea /cheratinizarea celulelor este în scădere. Met estrul durează fie
până cățeaua fată, fie până nivelul de progesteron revine la normal.
Anestru s : are o durată variabilă ȋntre 15 -150 de zile, concentrația progesteronului se
reduce la nivelul bazal, abrupt înainte de fătare sau gradual la femele negestante.
Ovulația are loc la sfărșit ul căldurilor (estrului), foliculii maturându -se succesiv, fiind în număr
de 4-6 la femelel e de talie mică și până la 15 -20 la cele de talie mare. Prima faza estrală apare în
mod obiș nuit la vârsta de 6 luni, după ce că țeaua se apropie de g reutatea corporală a adultului
(Groza I., 2006).

1.1 Momentul ovulației și hormonii implica ți

Ovulația se urmărește prin diferite metode, majoritatea fiind legate de nivelul unor
hormoni direct responsabili de fazele ciclului sexual, cum ar fi dozarea progesteronului,
estrogeni lor, urmărirea nivelelor de LH ș i FSH; sau întocmirea unui frotiu vaginal și pri n tehnici
de citologie, estimarea perioadei în care se află cățeaua.
Estradiolul este primul hormon de referință al ciclului estral, o creștere a nivelului de
estrogen este vizualizat clinic prin primele semne de călduri. Vaginul și vulva prezintă tumefie re,

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

8
se observă scurgeri sero-sangvinolente. Sub efectul estr adiolului , peretele vaginal se îngroașă și
se exfoliază (la nivelul epiteliului mucoasei vaginale) , de aici provenind și primele modificări pe
care le putem vedea la examenul citologic. Nivelul său crește în proestrul timpuriu, ajunge la un
peak și apoi scade, producând modificări tipice și în comportamentul femelei (Scarlette Gotwals,
2001).
LH-ul (hormonul luteinizant ) este hormonul central al ci clului estral. Creșterea sa este
stimulată de ni velul crescut de e strogen, care persistă o perioada variabilă, și are drept rezultat,
peste aproximativ 2 zile, ovulația. Ov ocitele însă nu sunt mature și nici capabile de a fi
fecundate, ele devin fecundabile dupã încă 2 zile de la creșterea nivelului de LH, iar apoi ele își
mențin capacitatea fecundantã pentru încă 1 până la 3 zile. Aș adar, notând ziua « peak »-ului de
LH ca fiind ziua 0, femela este în perioada fertilă în zilele 4, 5 și 6. Pentru a depista acest peak al
LH-ului sunt necesare teste sangvi ne zilnice (Scarlette Gotwals, 2001).
Creșterea progesteronului provoacă schimbarea secreției celulelor foliculare de la
estrogen la progesteron (Scarlette Gotwals, 2001).
Progesteronul este hormonul necesar susținerii gestației. La câini nivelul de pr ogesteron
își atinge limita inferioară (<1,0 ng/ml) înaintea peak -ului de LH. Urmărind creșterea de LH și
nivelul de progesteron din sânge va creș te, până la o valoare de aproximativ 1,5 -2 ng/ml. După
peak -ul de LH, progesteronul își continuă creș terea pân ă la un nivel > 5 ng/ml în zilele 2 până la
4 și în continuare la o valoare > 10 -15 ng/ml la sfârș itul perioadei fertile (Scarlette Gotwals ,
2001 ).
Creșterea inițială a progesteron ului se leagă strâns de peak -ul de LH și astfel o putem
folosi, în practică, pentru a plani fica perioada fertilă a femelei (fig. 1.1 .).

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

9

Fig. 1.1 . – Evoluția hormonilor pe parcursul unui ciclu sexual până la fătare
(Sursa : https://www.petcoach.co/article/hormone -levels -determining -breeding -times -and-
whelping -date/ )

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

10
Capitolul 2
METODE FOLOSITE PENTRU DEPISTAREA OVULAȚIEI

2.1 Frotiu citovaginal

În general prima variantă folosită pentru a depista perioada ciclului estral în care se află
cățeaua este efectuarea unui frotiu vaginal și chiar pentru stabilirea momentului optim pentru
montă. Modific ările citologice re flectă în totalitate schimbările endocrin ologice care au loc în
organismul femelei, în principal concentrația de estr adiol din sânge (fig. 2.1 .). Nivelul crescut de
estrogen determină o cornificare a celulelor caracteristice estrului (Robert Bowen, 1998).

Fig. 2.1 . – Zilele optime pentru realizarea testări i hormonale și a frotiu lui cito-vaginal
(Sursa : https://www.petcoach.co/article/hormone -levels -determining -breeding -times -and-
whelping -date/ )

Pentru a identifica diferitele stadii este de cele mai multe ori suficientă examinarea unei
singure lame, însă există unele situații, de exemplu pentru a diferen ția faza de proestru de
metestru, unde sunt necesare mai multe amprente.
Tamponul trebuie introdus adânc în vagin pentru a evita colectarea de celule din
vestibulul vaginal, formând un unghi ascuțit față de peretele dorsal al cavităț ii. La rasele de talie
mare (ex.: Saint Bernard, Dobermann , Ogar englez etc ) se introduce pâna la 15 cm iar la cele de
talie mică (ex.: Yorkshire Terrier, Chihuahua) undeva în jur de 5 cm (Robert Bowen, 1998).

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

11
După ce tamponul este introdus complet este necesară rotirea sa de 2-3 ori pentru a
colec ta cantitatea dorită de celule (fig. 2.2 .).

Fig. 2.2. – Recoltarea celulelor si p oziționarea corectă a tamponului steril în vagin
(Sursa :https://books.google.ro/books?id=PMY0AwAAQBAJ&q=fluid&hl=hu&source=g
bs_word_cloud_r&cad=5#v=snippet &q=colection%20vaginal%20fluid&f=false )

După prelevare celulele sunt întinse pe o lamă de sticlă (fig .2.3.), uscate și colorate prin
metoda rapidă Diff -Quick (fig. 2.4.), timpul necesar pentru fixare este de aproximativ 10 -15
secunde pentru fiecare din cele trei soluții, după car e frotiul ( fig. 2.5.) poate fi examinat la
microscop cu obiectivul 40x (Kustritz M. ,2003; Bunagura J.D , Twedt D.C, 2009; Merck, 2014 ).

Fig. 2.3 . – Rularea tamponului pentru realizarea amprentei citologice pe lamă
(Sursa : http://www.slideshare.net/EmmanuelFontaine2/2014 -timing -of-ovulation -in-the-
canine -species -whats -new-in-2014 )

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

12

Fig. 2.4 . – Imersare în coloranții Diff -Quick
(Sursa : https://i.ytimg.com/vi/DyLB6AeAc_g/maxresdefault.jpg )

Fig. 2.5. – Lamă cu amprentă colorată pregă tită pentru examinare
(Sursa : http://hjcam.hcavs.gr/en/v2 -i1-time-for-diagnostics )

Majoritatea celulelor depistate printr -un frotiu sunt celule epiteliale vaginale. Mai găsim
pe lângă acestea un număr variabil de leucoc ite, eritrocite, bacterii, și un număr mic compus din
alte celule și microorganisme contaminante. Citirea unui frotiu înseamnă clasificarea celulelor
epiteliale în unul dintre cele 3 tipuri fundamentale: celule parabazale, intermediare s i
superficiale.

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

13
Celulele parabazale (fig. 2.6 .) sunt cele mai mici ca și dimensiune de pe frotiu, rotunde
sau aproape rotunde și au un raport citoplasmă/nucleu (1 :1) mare. Ele predomină în diestrus,
anestrus și la începutul proestrului, dar lipsesc în estrus (Robert Bowe n, 1998).

Fig. 2.6 . – Celule parabazale
(Surs a : http://www.vivo.colostate.edu/hbooks/pathphys/reprod/vc/pbasals.jpg )

Celulele intermediare (fig. 2.7 .) pot varia ca și formă și mărime, dar în mod normal sunt
de 2-3 ori mai mari decât celulele parabazale și apar în toate stadiile ciclului, exceptând estrul.
Raportul citoplasmă/nucleu este în favoarea citoplasmei (Robert Bowen, 1998).

Fig. 2.7 . – Celule intermediare
(Sursa : http://www.vivo.colostate.edu/hbooks/pathphys/reprod/vc/intermed.jpg )

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

14
Celulele superficiale (fig. 2.8 .) sunt mari, au formă poligonală cu nucleul absent sau
picnotic. Celulele fără nucleu sunt considerate complet cornificate și nu se întâlnesc în proestrs și
anestrus, ele fiind o caracteristică citologică a estrului (Robert Bowen, 1998).
Fig. 2.8 . – Celule superficiale
(Sursa : http://www.vivo.colostate.edu/hbooks/pathphys/reprod/vc/superx2.jpg )

Depistarea ovulației cu ajutorul frotiului se bazează pe corectitudinea cu care se execută
recoltarea și colorarea frotiului și mai apoi pe citirea imaginii care apare în timpul examinării la
microscop.

2.2 Determinarea nivelului de progesteron plasmatic

Determinarea nivelului de progesteron din ser este tehnica cea mai sigură pentru
stabilirea perioadei fertile, și stabilirea exactă a momentului oportun pentru montă. Determinările
se pot face în cadrul unui laborator specializat sau cu diferite kit -uri de dozare: Ovucheck
Premate (Biovet Canada), Stat-Pro (ICG/Synbiotics), Target (Biometallics), PreMate (Camelot
Farms)etc. Aceste kit -uri sunt folosite pentru a determina rapid perioada în care se află femela și
funcționează bine pentru montele care decurg n ormal. Pentru montele în care se folosește spermă
refrigerată sau congelată, femele cu probleme anterioare de infertilitate sau monte cu masculi cu
număr redus de s permatozoizi, determinarea cantitativă a progesteronului este recomandată
(Scarlette Gotwals , 2001).
Nivelul progesteronului înainte de peak -ul de LH este în limitele normale, crește apoi la
1,5-2 ng/ml la începutul peak -ului, apoi până >5 ng/ml în timpul acestuia și ajunge până la valori
de >10 -15 ng/ml la sfârșitul perioadei fertile. Momentul peak -ului de LH poate fi estimat în

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

15
funcție de creșterea nivelului de progesteron, acestea fiind strâns corelate (Sca rlette Gotwals,
2001) (fig. 2.9. ).

Fig. 2 .9. – Modificările estr adiolului , progesteronului si LH -ului pe parcursul unui ciclu
sexual până la fătare
(Sursa : http://www.peteducation.com/images/articles/ill_breeding1.gif )

Detectarea momentului optim pentru montă este crucial mai ales din punctul de vedere al
crescătorilor, deoarece cățelele au un ciclu mono -estru, intervalul dintre călduri fiind de 6 -7 luni.

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

16
Capitolul 3
MATERIALUL SEMINAL
3.1 Caracteristicile materialului seminal

Înseminarea artificială se clasifică după locul de depunere al materialului seminal astfel:
înseminare intra -vaginală profundă (A/I), înseminare transcervicală (TCI) sau implant intrauterin
(metoda chirurgica lă) (William C. Truesdale, 2011).
Materialul seminal este format din trei fracțiuni: prima este un lichid clar denumit
fracțiune pre -spermatică (care de obicei este înlăturată, cu un volum între 0 .5-2 ml); a doua parte
este fracțiunea spermatică, cu densitate crescută, lăptoasă ( aceasta este partea de interes și care
dorim să o colectăm), iar spre final obținem ultima fracțiun e, cea prostatică, un lichid clar , dar de
care nu avem nevoie în cazul în care dorim conservarea materialului seminal (Valeria Rickard,
2011).
Evaluarea este o etapă foarte importantă și se realizează prin etalarea unei picături de
material seminal pe o lamă curată, uscată și preîncălzită care va fi examinată la microscop. Se
urmarește motilitatea, morfologia spermatozoizilor, concentrația materialului seminal recoltat și
alte caracteristici după cum urmează în tabelul (3.1 .) de mai jos (Rober t Bowen, 200 3) :

Tabel 3.1 .
Valori pentru principalele caracteristici ale materialului seminal
Parametru Valori normale
Volum de ejaculat (fracțiunea spermatică) 1-6 ml
Concentrația 100-500 milioane/ml
Număr total de spermatozoizi pe ejaculat 300-2000 milioane
Motilitate progresivă >70%
Morfologie >80%
(Sursa : http://www.vivo.colostate.edu/hbooks/pathphys/reprod/semeneval/dog.html )

 Culoarea normală este opacă, alb-lăptoasă; dacă ejaculatul este roșu sau maro aceasta
indică prezența de sânge, culoarea galbenă se datorează urinei și cea verde unei infecții;
 Volumul (în ml/ejaculat) poate varia considerabil în funcție de vârstă, rasă și libidoul
masculului de la 1 ml la 20 ml;

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

17
 pH-ul se măsoară numai la fracțiunea prost atică și trebuie să fie între 6.5 și 7. 0, devieri
de la aceste valori pot indica inflamații sau infecții;
 Mobilitatea măsoară procentajul total de spermatozoizi care sunt vii și se mișcă; ea
trebuie s ă fie > 70% (fig. 3.1 .);
 Morfologia celulelor spermatice este dificil de observant fără un microscop performant, o
colorație adecvată și puțină experiență. Colorația Diff -Quick poate fi folosită și în acest
caz cu succes. Se consideră normal când > 80% din spermatozoizi sunt corecți din punt
de vedere structural;
 Numărul spermatozoizilor poate fi determinat cu dificultate, însă se poate folosi un
hemocitometru (fig. 3.2 .) pentru ușurarea procedeului ( William C. Truesdale, 2011).

Fig. 3. 1. – Spermatozoid viu și normal și spermatozoid mort
(Sursa : http://www.vivo.colostate.edu/hbooks/pathphys/reprod/semeneval/morph.html )

Fig. 3.2 . – Hemocitometrul
(Sursa : http://www.vivo.colostate.edu/hbooks/pathphys/reprod/semeneval/conc.html )

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

18
3.2 Conservarea materialului seminal prin congelare

În cele mai multe cazuri sperma este colectată manual și fracțiunea spermatică este
folosită pentru congelare. Pașii cei mai importanți din această tehnică sunt: centrifugarea, diluția,
echilibrarea termică, ambalarea, congelarea și decongelarea.
Centrifugarea are ca scop îndepărt area fracțiunii prostatice care s -a dovedit că are un
efect negativ asupra motilității și viabilității spermatozoizilor tre cuți prin congelare -decongelare
și de a standardiza cu ajutorul diluției concentrația finală a materialului seminal la spe rmatozoizi
(Linde -Forsberg, C. , 2005). Cel mai utilizat protocol de centrifugare este la 600 -700 rotații/minut
timp de 5 -10 minute (Igna V, 2007).
Diluarea spermei are următoarele roluri: protejarea spermatozoizilor de efectele negative
ale temperaturilor scăzute ș i obținerea unei concentrații finale standard. În majoritatea sistemelor
materialul seminal final ajunge la o diluție de 50 -100 milioane de spermatizoizi pe 0,5 ml/paietă,
când folosim 2 -4 paiete pentru o însămânțare (Igna V. , 2007).
Pregătirea spermei pentru congelare include ambalarea și divizarea care permit
depozitarea materialului în doze ușor identificabile: granule, paiete, palate sau tuburi. Curent, cea
mai comună formă de ambalare a materialului seminal congelat pentru câini sunt granulele (fig.
3.3.) sau paietele (fig.3.4 .), deoarece ele prezină câteva avantaje în plus față de celălalte metode:
volum redus (crește capacitatea de stocare), congelare uniformă, posibilitatea de identificare și
marcare ușoară (numele câinelui, d ata colectării, etc.) (Igna V., 2007).
Înaintea congelării, materialul este răcit până la 4°C și păstrat la această temperatură un anumit
interval de timp (1 -4 ore) în funcție de protocolul utilizat. Acest proces dă posibilitatea spermei
să dezvolte o rezistență la șocul termi c care vine odată cu congelarea.
Congelarea în sine poate fi realizată cu ajutorul unor congelatoare programabile sau prin
punerea paietelor la distanțe diferite deasupra vaporilor de azot lichid. Ultimul stadiu al
congelării este introducerea direct în azot lichid la -196 °C (Igna V., 2007).
Extragerea paietei sau tubului cu granule din azotul lichid este recomandat să se facă cu
ajutorul unei pense special destinată. Dacă paieta este extrasă cu mâna, trebuie să fie prinsă de la
nivelul dopului uzinal. După extragere, se impune o singură mișcare puternică în scopul
îndepărtării urmelor de azot rămase și a condesului format.
Transferul paietelor în apa încălzită trebuie făcut cât mai repede posibil. Decongelarea în
interiorul unei paiete de 0. 5 ml sau un ui tub de granule , la temperatura camerei, începe în
4 secunde de la extragerea din azot, ceea ce duce la alterări ale materialului seminal conținut
(Neagu V., 2011).

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

19
Rata de decongelare poate influența semnificativ rezultatele și este strâns co relată cu
protocolul de congelare folosit. O decongelare înceată poate duce la recristalizare, în timp ce o
procedură de decongelare prea rapidă poate cauza balonarea celulei, deoarece se creează un stres
osmotic brusc asupra celulei deshidratate (Neagu V. , 2011).
Decongelarea granulelor sau paietelor în apă de 70°C, timp de 8 secunde, are ca și
rezultat o rată de supraviețuire a spermatozoizilor mult mai mare decât dezghețarea făcută cu apă
la 37°C timp de 15 până la 60 de secunde (Olar, T.T. ,1984; Concannon, P.W. , Battista, M.,
1989; Rota , 1998; Peña, A.I., Linde -Forsberg, C.,2000). Pentru baia de apă nu sunt necesare
materiale sofisticate putându -se utiliza chiar și un borcan suficient de înalt, fiind important ca
întreaga paietă sau tub de granule să fie introdu să în apă.

Fig. 3.3 . – Tub cu granule și Fig. 3.4 . – Paiete
(Sursa : http://animalhospitalofwoodstock.com/reproductive -services/frozen -semen/frozen –
semen -procedure.html )

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

20

PARTEA II – MATERIALE ȘI METODE

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

21
Capitolul 4
MATERIALE ȘI METODE

Cercetările s -au efectuat în perioada noiembrie 2016 – iunie 2018, în cadrul Clinicii de
Reproducție, Obstetrică și Ginecologie Veterinară a Facultății de Medicină Veterinară Cluj, pe
un număr de 5 c ățele cu vârsta cuprinsă între 2.5 ani și 5 ani, aparținând raselor diferite: Ogar
Englez, Saint Bernard (două female), Gold en Retriever ș i Dobermann .

Cazul numărul 1
Femelă din rasa Ogar E nglez , în vârstă de 5 ani și 44 kg masă corporală. Femela și -a
încheiat cariera sportivă la vârsta de 4. 5 ani, înregistrând performanțe remarcabi le în cursele de
500 de metri. Aceste performanțe au recomandat -o pentru reproducție, proprietarul optând pentru
un mascul rezident in Australia, deținător al recordului “All Time” al curselor pe distanța de 500
de metri . Din cauza condițiilor sanitare extrem de severe (carantină de 6 l uni, Australia fiind țară
indemnă de rabie) precum și a costurilor ridicate de transport proprietrul femelei a optat pentru
importul de material seminal conservat prin metoda congelării.
Frotiu l vaginal hormonal a fost efectuat în vedere a monitoriz ării cic lului estral sub
aspectul diagnosticului pr ecoce al unor eventuale stă ri septice subclinice ale aparatului genital
precum și a stabilirii (cu aproximaț ie) a momentului optim p entru IA. Examenul frotiului rezultat
a relevat o multiplicare anormală a florei bacteriene precum ș i o crestere a num ărului de
neutrofile. Femela a fost supus ă unui tr atament cu Synulox pe o perioadă de 4 zile preoperator și
5 zile postoperator.
Examenul ecografic a relevat aspecte fiziologice ale aparatului genital.
Nivelul de progesteron , a fost măsurat prin metoda electrohemilumin escenț ei in zilele 9,
11, 13 si 15.
Înseminarea s -a realizat în a cincisprezecea zi a ciclului de c ălduri , când nivel ul
progesteronului plasmatic a atins valoare de 17,8 ng/ml (55 nmoli/l).

Cazul num ărul 2

Femelă din rasa Golden Retriever , în vârst ă de 5 ani și masă corporală de 36 kg, având o
stare de întreținere foarte bună si clinic sănătoasă.

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

22
Frotiu l cito-vaginal a relevat aspectele fiziologie ale ciclul estral, observându -se celule
epiteliale din straturile superficial respectiv intermediar, procentul de cheratinizare fiind de 90%.
Flora bacteriana s -a prezentat în mod fiziologic, nefiind necesar tratamentul loca l sau sistemic.
Ecografia a relevat aspecte fiziologice ale apar atului genital și anume folicul i
predehiscenti la nivelul ovarului drept.
Nivelul de progesteron : 23 ng/ml (73.24 nmoli/l).
Înseminarea s -a realizat în a cincisprezecea zi a ciclului de călduri, c ând nivelul
progesteronului plasmatic a at ins valoare de 23 ng/ml (73. 24 nmoli/l).

Cazul numărul 3

Femelă din rasa Saint Bernard cu părul scurt , în vârstă de 2.5 ani cu o masă corporală de
55 kg, având o stare de întreținere foarte bună și clinic sănătoasă.
Anterior acestui ciclu sexual, femela a fost diagnosticată cu ascită și hipopericard din cauză
idiopatică. Tratamentul recomandat și administrat a fost de 5mg/kgc Furosemid și 0.5 mg/kgc de
Vetmedin ( în două doze) timp de 2 săptămâni, primind până a cincea zi de călduri. Proprietarul
a optat pentru această variantă datorită distanței, timpului necesar și a stresului de transport.
La frotiu cito-vaginal s-au observat celule epiteliale vaginale din straturile superficial și
intermediar, f iind complet cornificate și fără nucleu vizibil.
Examenul ecografic a relevat aspect fiziologice normale ale aparatului genital.
Nivelul de progesteron: 10 ng/ml(31 .84 nmoli/l) .
Înseminarea s-a realizat în a noua zi a ciclului de călduri, când nivelul progesteronului
plasmatic a atins valoarea de 10ng /ml(31.84nmoli/l).

Cazul numărul 4

Femelă din rasa Saint Bernard cu părul lung, în v ârstă de 4 ani și o masă corporală de 70
kg, având o stare de întreținere foarte bună si clinic sănătoasă . Proprietarul a optat pentru această
opțiune , deoarece femela a avut antecedente de resorbție fetală la montele anterioare , din cauza
unei insuficiențe luteale .
La examinarea f rotiu lui vaginal s-au ober vat celule complet cornificate , cu nucleu sau
fără nucleu picnotic, rezultând că femela este în estrus.
Examenul ecografic a relevat aspecte fiziologice normale ale aparatului genital.
Nivelul de progesteron: 7 ng/ml(22.29nmoli/l).

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

23
Înseminarea s-a realizat în a opta zi a ciclului de călduri, când nivelul progesteronului
plasmatic a atins valoarea de 7ng/ml (22.29nmoli/l).

Cazul numărul 5

Femelă din rasa Dobermann de culoare neagră cu pete de foc , în vârstă de 5 ani și o masă
corporală de 37 kg , având o stare de întreținere foarte bună si clinic sănătoasă. Proprietarul a
optat pentru această variantă datorită distanței, timpului necesar și a stresului de transport.
După relizarea f rotiu lui vaginal s-au observat aspectele fiziologie ale ciclul e stral, celule
epiteliale din straturile superficial respectiv intermediar, procentul de cheratinizare fiind de
>90%. Tratamentul local sau sistemic nu a fost necesar, încărcătura microbiană fiind fiziologică.
Ecografie a relevat aspecte fiziologice ale apa ratului genital (foliculi).
Nivelul de progesterone: 27 ng/ml (85. 98 nmoli/l).
Înseminarea s-a realizat în a cincispreze cea zi a ciclului de călduri, câ nd nivelul
progesteronului plasmatic a atins valoare de 27 ng/ml (85.98 nmoli/l).

4.1. Examinarea materialului seminal după decongelare

Cel mai frecvent test realizat după decongelare este reprezentat de evaluarea mobilității
spermatozoizilor. Din păcate, mobilitatea, pe lângă faptul că reprezintă o caracteristică destul de
subiectivă a calității, nu reprezintă o garanție a fertilității.
La 8 secunde după imersia în apă cu temperatură de 70°C , materialul seminal decongelat
este gata pentru inocularea în coarnele uterine ale femelei. Înainte de începerea intervenției , o
parte din cantitatea rămasă, se examinează la microscop între lamă (curată, uscată și preîncălzită
pentru a nu produce un șoc termic spermatozoizilor) și lamelă. În urma examinării cu obiectivul
de 40x se observă o densitate mare a spermatozoizilor, mobilitate crescută și lipsa anomaliil or
(fig 4. 1.).
Se poate concluziona că materialul seminal a fost colectat, congelat și adus din nou la
tempetura de utilizare în condițiile cele mai bune și fără a afecta calitatea sa.
După 30 de minute din cauza căldurii produse de becul microscopului spe rmatozoizii de
pe lamă se epuizează mai repede decât în mod normal (fig 4. 2.).

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

24

Fig. 4. 1. – Material s eminal examinat cu obiectiv de 40x înainte de înseminare

Fig. 4 .2. – Material seminal examinat cu obiectiv de 40x la microscopul electronic
la 30 de minute după examinarea inițială prezintă spermatozoizi aglutinați

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

25
Cazul num ărul 1
Mascul este rezident in Australia, în vârstă de 3 ani și este deținător al recordului “All
Time” al curselor pe distanța de 500 de metri.
Materialul seminal utilizat a fost supus conservării prin congelare cu metoda Clone și s -a
folosit granule cu o concentrație de 150 spermatozoizi/doza și mobilitate totală de 85 % din care
mobilitatea progresivă a fost de 54%.

Cazul numărul 2
Materialul seminal provine de la un mascul rasa Golden Retriever în vârstă de 4 ani,
rezident in Spania.
Materialul seminal utilizat a fost supus conservării prin congelare cu metoda Clone și s -a
folosit granule cu o concentrație de 150 milioane de spermatoz oizi/doza și o mobilitate totală de
98% din care mobilitatea progresivă a fost de 49 .84 %. Evaluarea mater ialului seminal a fost
realizată prin sistemul CASA la disciplină de Reproduc ție, FMV Cluj -Napoca.

Cazul numărul 3
Materialul seminal provine de la un mascul rasa Saint Bernard în v ârstă de 3 ani ,
rezident î n Norvegia .
Materialul seminal utilizat a fost supus conservării prin congelare cu metoda Clone și s -a
folosit granule cu o concentrație de 150 milioane de spermatozoizi/doză și o mobilitate totală de
38% din care mobilitatea progresivă a fost de % .

Cazul numărul 4
Materialul seminal provine de la un mascul rasa Saint Bernard în vârstă de 8 ani ,
rezident î n Norvegia .
Materialul seminal utilizat a fost supus conservării prin congelare cu metoda Clone și s -a
folosit granule cu o concentrație de 150 milioane de spermatozoizi/doză și o mobilitate totală
de 56% din care mobilitatea progresivă a fost de % .

Cazul numărul 5
Materialul seminal provine de la un mascul rasa Dobermann în vârstă de 3.5 ani, rezident
în Olanda .
Materialul seminal utilizat a fost supus conservării prin congelare cu metoda Clone și s -a
folosit paiete cu o concentrație de 150 milioane spermatozoizi /doză și mobilitate totală de 66 %
din care mobilitatea progresivă a fost de 43% .

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

26
4.2 Considerații practice privind conservarea materialului seminal

Congelarea spermei este o metodă de conservare a spermatozoizilor, teoretic pentru un
timp nelimitat. Metoda congelării joacă un rol important în conservarea diversității genetice a
speciilor a diferitelor rase canine și a reproducției asistate. Principiul crioconservării a
materialului seminal este reducerea temperaturii spermatozoizilor producând astfel o reducere a
activității metabolice a spermatozoizilor care permite stocarea acestora.
Nenumerate metode de congelare au fost descrise în literatură în ultimii 30 de ani. Unele
metode sunt mărci înregistrate (patentate), care necesită cumpărarea francizei pentru a putea fi
utilizat. Agențiile de proprietate dețin următoarele metode: Canine Cryobank, CLONE,
International Canine Semen Bank (ICSB) și Synbiotics. Celelalte sisteme cu protocoale publicate
sunt: extenderul Norvegian Tris, sistemul1 și 2 Uppsala -Equex și modificările acestora,
extenderul CERREC și extenderul CERCA; extenderul a fost dezvoltat de către England C.G.W.
și Lofstedt R. (Concannon and Battista 1989; England 1993; Farstad 1996; LindeForsberg et al.
1995; Peña and Linde -Forsberg 2000 a, b ) și alte extendere și metode de crioprezervare.
Materialul seminal congelat primit este transportat într -un rezervor Dry Shipper (fig. 4.3.)
care de obicei nu conține azot lichid măsurabil. Rezervorul a fost încărcat cu azot lichid și ar
trebui să țină te mperatura azotului lichid ( -196 ° C) timp de câteva zile. Acest transportator (fig.
4.3.) are un canistru, în care au fost plasate atât mediul de decongelare, cât și materialul seminal
congelat. De obicei, un mediu de dezgheț va însoți fiecare flacon de ma terial seminal congelat.
Mediul de decongelare a fost așezat pe o trestie de aluminiu, iar materialul seminal congelat a
fost plasat pe o trestie de aluminiu.
Când sosește pachetul, rezervorul trebuie verificat pentru vapori prin scoaterea capacului/
dopul ui de gât trăgându -l direct din rezervor. Când se procedează astfel, vaporii trebuie văzuți în
gâtul rezervorului. Aceasta indică faptul că conținutul este încă înghețat. În acest moment,
rezervorul de transport trebuie fie umplut cu azot lichid, fie mater ialul seminal și de dezgheț să
fie îndepărtat și plasat într -un rezervor de stocare a materialului seminal.
Atunci când transferați materialul seminal din rezervorul de transport către rezervorul de
stocare, procedați astfel foarte repede, deoarece flacoan ele de material seminal pot conține un
azot lichid care ar putea provoca ruperea acestuia dacă este lăsat afară din azotul lichid.
Când se pregătește să se dezghețe sperma pentru înseminare, scoateți un flacon de mediu
de decongelare de pe banda de alumini u și lasă să se dezghețe la temperatura camerei. Ștergeți
flaconul uscat și turnați conținutul într -unul dintre pungile de dezghețare Whirl -Pak care îl

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

27
însoțesc. Puneți punga într -o baie de apă 70 -80 ˚C timp de cel puțin 2 minute înainte de a prelua
mater ialul seminal congelat.
Materialul seminal congelat se află într -un flacon cu capac cu șurub. Dacă în fiolă există
azot lichid, trebuie să păstrați flaconul în azot lichid până când acesta este deschis. Flaconul
poate exploda dacă este scos din azot lichid înainte de deschidere.
Desfaceți flaconul din trestie. Dacă observați lichid în flacon sau dacă auziți un sunet
puternic, în flacon există încă azot lichid. Țineți flaconul deschis în aer până când tot lichidul se
evaporă, apoi răsturnați rapid flaconul în punga de decongelare, astfel încât materialul seminal
granulat să cadă în mediul încălzit. Se pune rapid în baia de apă și se masează punga de dezgheț
până când toate paietel e se dizolvă.
Fig. 4.3. Dry Shipper și canistrul de transport ul
(Sursa : http://www.majesticgaits.com/mve.htm )

4.3 Tehnica înseminării artificiale prin metoda chirurgicală

Femela este pregătită pentru intervenției se pune cateter venos la membrul anterior drept;
se tunde și se rade abdominal pe linia alba (fig.4. 4.) unde va avea loc incizia și se administrează
Diazepam i.v. (doza pentru Diazepam este de 0 .4 mg/kg de masă corporală); la 1 minut după
Diazepam se administrează Ketamină i.v. (doza pentru Ketamină este de 10 mg/k g masă
corporală). După ce femela a adormit se trece la a sepsia și antisepsia locului de incizie ( fig. 4. 5.).
După instalarea anesteziei femela este contențonată pe masa de operație, imobilizată în
poziție ventro -dorsală, cu expunerea regiunii mezo – și hip ogastrice. Se administrează 10

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

28
ml/kgc/oră soluție perfuzabilă de NaCl 0,9% pentru a hidrata pe tot parcursul intervenției
chirurgicale.
În funcție de greutatea și diferențele de metabolizare s -a suplimentat doza inițială de
Ketamină corespunzător la toate cazurile.
Se efectuează o incizie pe linia albă de aproximativ 6 -10 centimetri între pubis și ombilic,
în funcție de talia animalului . Chirurgul folosește o seringă sterilă pentru a aspira materialul
seminal din paietă sau din tubul cu granule. Coarnele uterine sunt aduse în plaga operatorie (fig.
4.5.) și în fiecare corn uterin, cu ajutorul unei branule de 24 G înclinată la 45° introduce m
materialul seminal ales (fig. 4 .6.). În tot acest timp un ajutor, prin taxis digital, obstrucționează
partea distală a cornului forțând progresia materialului spre oviduct (fig.4.7.) . Cantitatea de
material seminal administrat diferă în funcție de mărime a femelei, astfel la cele de talie mare se
introduce până la 3 ml, la cele de talie medie între 1.2 – 1.5 ml, iar la cele de talie mică între 0.75
– 1.2 ml. După introducerea materialului seminal, se efectuează un ușor masaj dinspre locul
inoculării spre o viduct, pentru a f avoriza înaintarea materialului (fig. 4 .8.). Locul de puncție se
tampone ază până la oprirea sângerării și uterul este repus în poziția inițială (fig. 4. 9.). Procedura
se încheie prin sutura planurilor incizate (fig.4. 10.).
Managementul algic s -a realizat prin administrarea de Novasul (doza in mg/kgc), iar antibio –
terapia necesară preventiei complicatiilor septice post -operatorii cu Synulox (doza in mg/kgc).

Cazul numărul 5 – Dobermann

Fig. 4. 4. – Plagă operatorie pregătită prin tundere și antisepsie pentru intervenție

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

29

Fig. 4. 5. – Coarnele uterine aduse în plaga operatorie

Fig. 4. 6. – Histero -centeză într -un unghi de 45°

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

30

Fig. 4 .7. – Introducerea materialului seminal în timp ce un ajutor face taxis digital
,prin obstrucționearea lumenul cornului uterin în partea ce duce spre uter

Fig. 4. 8. – Masaj ușor dinspre locul inoculării spre oviduct pentru favorizarea
înaintării a materialului seminal

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

31

Fig 4.9. – Repunerea uterului în poziția inițială

Fig. 4.10. – Sutura planurilor incizate

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

32

Cazul numărul 3 – Golden Retriever

Fig. 4.4. – Plagă operatorie pregătită prin tundere și antisepsie pentru intervenție

Fig. 4.5. – Coarnele uterine aduse în plaga operatorie

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

33

Fig. 4.6. – Histero -centeză într-un unghi de 45°

Fig. 4.7. – Introducerea materialului seminal în timp ce un ajutor face taxis digital
,prin obstrucționearea lumenul cornului uterin în partea ce duce spre uter

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

34

Fig. 4.8. – Masaj ușor dinspre locul inoculării spre oviduct pentr u favorizarea
înaintării a materialului seminal

Fig 4.9. – Repunerea uterului în poziția inițială

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

35

Fig. 4.10. – Sutura planurilor incizate

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

36
Capitolul 5
REZULTATE ȘI DISCUȚII

Cazul numărul 1

Femela, din rasa Ogar Englez , s-a prezentat la 24 de zile după data înseminării la examen
ecografic. În urma controlului ecografic s -a constatat că femela este gest antă, având un număr
aproximativ de 10 -11 pui (fig.5 .1. ).
La 62 zile de la înseminare, femela a născut natural un număr de 11 pui, toți sănătoși (fig.5 .2. )
.

Fig. 5.1. – Confirmarea gestației

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

37

Fig. 5.2. – Femela cu puii

Cazul numărul 2

Femela , din rasa Golden Retriever , s-a prezentat la 7 zile după înseminare cu scurgeri
sero-vaginale de la nivel ul vaginal (fig.5.3.) și având nivelul de progesteron de 14.07
ng/ml(44.83 nmoli/l). Din cauza nivelului de progesteron scăzut, care indică o insuficiență
luteinică, se face o terapie de subst ituție cu Utrogestan în doză de 200 mg/12 h, intravaginal,
până în ziua 24.
La controlul ecografic de 24 de zile după înseminare s -a observat mortalitate fetală
parțială (fig.5.4.) , diagnosticul fiind de Single Puppy Syndrom. Proprietarul s -a decis pentru
producerea avortului cu PGF ₂α .

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

38

Fig. 5.3. – Scurgere sero -vaginală Fig. 5.4. – Mortalitate fetală parțială

Cazul numărul 3

Femela, din rasa Saint Bernard cu părul scurt, a avut după 17 zile de la înseminare nivelul
de progesteron de 55.5 ng/ml(176.75nmoli/l), fiind o valoare normal pentru susținerea gestației.
La controlul ecografic de 24 zile după înseminare s -a observat un început de resorbție
fetală, datorat probabil diureticului (Furosemid) administrat până aproape de ziua înseminării.
S-a constatat că administrarea de Furosemid este contraindicat animalelor gestante și conform
testărilor făcute în acest sens duce la anomalii fetale și resorbție fetală .

Cazul numărul 4
Femela, din rasa Saint Bernard cu părul lung, a avut după 17 zile de la înseminare nivelul
de progesteron de 23.5 ng/ml(74.84nmoli/l). Această valoare se află în limita inferioară,
provocată probabil de o insuficiență luteală, și se recomandă terapie prin administrare de
progesteron.
La controlul ec ografic de 24 zile după înseminare s -a observat că uterul este gol.
Proprietarul ne -a comunicat prezența căldurilor prelungite, care susține în continuare ipoteza
nivelului scăzut de progesteron fapt pentru care gestația a fost întreruptă.

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

39
Cazul numărul 5
Femela, din rasa Dobermann, s-a prezentat la 24 de zile după data înseminării la examen
ecografic. În urma controlului ecografic s -a constatat că femela este gestantă, având un număr
aproximativ de 3 pui .
La 62 zile de la înseminare, femela a născut natural un număr de 3 pui, toți sănătoși
Fiecare caz este prezentat succinct în Tabelul 5.1. Putem concluziona că dintr -un lot de 5
femele % au rămas gestante și tot atâta au și dus gestația la un bun sfârșit. Numărul de produși
din fiecare cuib a fost în limitele normale sau chiar peste media rasei.

Tabel 5.1.
Rezultatele în urma procedurii și caracteristicile fiecărui caz
Nr.
caz Rasa Vârsta
(ani) Mascul
(ani/locație) Tipul
materialului
seminal Mobilitate
Spermatozoizil or
(%) Control
ecografic Nr. de produși
fătați/viabili
1 Ogar
englez 5 3 / Australia Congelat
(granule) 85 Gestație
confirmată
(pui) 11 11
2 Golden
Retriever 5 4 / Spania Congelat
(granule) 98 Mortalitate
fetală
parțială 0 0
3 Saint
Bernard
(păr scurt) 2.5 3 / Norvegia Congelat
(granule) 38 Resorbție
fetală 0 0
4 Saint
Bernard
(păr lung) 4 8 / Norvegia Congelat
(granule) 56 Lipsa
gestației 0 0
5 Dobermann 5 3.5 /
Olanda Congelat
(paiete) 66 Gestație
confirmată
(pui) 3 3

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

40
Capitolul 6
CONCLUZII ȘI RECOMANDĂRI

 Metoda chirurgicală are ca și principal avantaj depunerea strict intra -uterină a
materialului seminal, fapt obligatoriu deoarece după decon gelare spermatozoizii î și pierd
capacitatea de a depășii sperm -selector -ul cervical;
 La aceasta metodă este necesară monitorizarea atentă a fenomenului de ovulație, prin
dozarea a progesteronului din ser și/sau LH -ului, deoarece tehnica implică o singură
inoculare de material seminal. În cazul materialului seminal conservat prin congelare
spermatozoizii își mențin capacitatea fecundantă aproximativ 9 ore după depunerea în
căile genitale ale femelei;
 Dezavantajele despre care putem discuta la acesta metodă ar fi : riscul anestezic, timpul
de recuperare al animalului in urma intervenției, metodă strict invaz ivă si costul ridicat
al acestei intervenții ;
 Această metodă de înseminare artificială nu influențează parturiția, aceasta putând fi una
fiziologică naturală ;
 În urma studiului efectuat pe cele 5 femele din rase diferite care au fost însemi nate prin
metoda chirurgicală, 2 au rămas gestante , reprezentând un procent de 40 % .

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

41
BIBLIOGRAFIE

1. Bunagura J.D, Twedt D.C, 2009 , Kirk’s Current Veterinary Therapy XIV by Saunders, an
imprint of Else vier Inc.ISBN 978 -0-7216 -9497 -9, pa g 977 -979
2. Concannon, P.W., Battista, M. , 1989 , Canine semen freezing and artificial inseminations. In:
Kirk RW (ed). Current Veterinary Therapy X: Small Animal Practic e. Philadelphia, WB
Saunders, pag 1247 -1259
3. England, G.C.W., Allen, W.E. , 1992 , Factors affecting the viability of canine spermatozoa. II.
Effects of seminal plasma and blo od. Theriogenology 37, pag 373 -381
4. Groza Ioan (coordonator), 2006 , Ginecologie, Andrologie și Obstetrică Veterinară –
Compendiu, Ed. Academiei Române București
5. Igna, V., 2007 , Sperm preservation, pag 265-278. In: Canine reproduction, obstetrics and
gynecology (in Romanian). Ed. Brumar, Timișoara; Romania
6. Kustritz Margaret V.R. , 2003 , Small Animal Theriogenology ISBN 0 -7506 -7408 -3, pag 35-35
7. Linde -Forsberg, C., 2005, Artificial insemination. Proc. ESAVS -EVSSA R-ENVN Congress,
Nantes, France
8. Merck’s Veterinary Manual, 10th Edition , 2014 , Ed. Callisto (translated in Romanian) , pag
1485,1959 -1960
9. Neagu Vasile Radu, 2011 , Cercetări privind prelevarea, prelucrarea și crioconservarea
materialului seminal canin, pag 53
10. Olar, T.T., 1984 , Cryopreservation of dog spermatozoa. PhD thesis. Fort Collins, Colorado
State University, USA
11. Peña, A.I., Linde -Forsberg, C., 2000b , Effects of Equex, one – or two – steps dilution, and two
freezing and thawing rates on post -thaw survival of d og spermatozoa. Theriogenology, 53, pag
859- 875
12. Richard W.Nelson, Guillermo C. Couto, Small Animal Internal Medicine, 5th Edition
Elsevier Health Sciences, 15 feb. 2014 , Part VIII, Reproductive System Disorders , pag 900-902
13. Robert Bowen, 1998 , Vaginal Cytology: Introduction and Index
14. Robert Bowen, 2003 , Collection and Evaluation of Semen: Introduction and Index
15. Rota, A., Ström, B., Linde -Forsberg, C., 1995 , Effects of seminal plasma and three different
extenders on canine semen stored at 4˚C. Theriogenology, 44, pag 885 -900
16. Rota, A., Linde -Forsberg, C., Vannozzi, I., Romagno li, S., Rodriguez -Martinez, H., 1998 ,
Cryosurvival of dog spermatozoa at different glycerol concentrations and freezing/thawing rates.
Reproduction in Domestic Animal s, 33, pag 355 -361
17. Scarlette Gotwals, 2001 , Timing the fertile period of the bitch: Brief review. Canine
Reproduction Seminar
18. Seager S.W.J., 1969 , Successful pregnancies utilizin g frozen dog semen. A.I. Digest, 17, pag 6 –
7
19. Sirivaidyapong, S., Ursem, P., Bevers, M.M., Colenbrander, B., 2001 , Effect of prostatic
fluid on motility, viability and acrosome integrity of chilled and frozen -thawed dog spermatozoa.
Journal of Reproduction and Fertility, Suppl 57, pag 383-386

Noémi – Blanka Benedek Înseminarea artificială prin metoda chirurgicală
cu material seminal congelat la cățea

42
20. Thomassen R., Farstad W., Krogenaes A. , Fougner J.A., Berg K.A., 2001 , Artificial
insemination with frozen semen in dogs: a retrospective study. J. Reprod. Fertil. (Suppl) , 57, pag
341-6
21. Valeria Rickard, 2011 , The Informed Breeder: Semen Collection and Packaging for Chilled
Semen Shipment
22. Vers tegen, J.P., K. Onclin, L.D.M. Silva and P.W. Concannon, 1999 , Effect of stage of
anoestrus on the induction of estrus by the dopamine agonist cabergol ine in dogs,
Theriogenology, 51, pag 597-611
23. Vlaams Diergeneeskundig Tijdschrift, 2011 , Preservation and shipment of chilled and
cryopreserved dog semen, pag 250
24. William C. Truesdale, July 2011 , Artificial Insemination Handout, ICSB -MA