J. Chem. Chem. Eng. (2020 ) 1-10 [627913]

J. Chem. Chem. Eng. (2020 ) 1-10
doi:

Asocierea genei ACE cu s indromul metabolic,
hiperte nsiunea arterială și boala Alzhe imer prin
RFLP -PCR
Stanislav Alexandra Alina1,2
1Department of Genetics, University of Bucharest, Romania 2Clinical laboratory –Bacteriology, Giurgiu County Emergency
Hospital, Romania

Abstract : Gena ACE este asociată cu boli multifactoriale: sindromul metabolic, obezitate, diabet zaharat, hipertensiune arterial ă,
acidentul vas cular cerebral, infarct miocardic, îmbătrânirea, boala Alzheimer, insuficiență pulmonară acută și infecțiile cu COVID -19.
Scopul studiului este testarea asocierii dintre polimorfismele genei ACE II, ID, DD și sindromul metabolic, hipertensiunea ar terial ă și
boala Alzheimer, pe baza datelor clinice și a investigațiilor de laborator biochimice la pacienții din mediu spitalicesc prin tehnica
RFLP -PCR. S-a efectuat genotiparea prin tehnica RFLP -PCR a genei ACE pe baza ADN -ului izolat din sânge total, de la 144 subiecții
selectați de la S.J.U.Giurgiu. Rezultatele au fost prelucrate statistic prin legea Hardy -Weinberg, Odds Ratio, Software VMD, Software
StatsDirect, Software PyElph. Polimorfismele genei ACE II, ID, DD, identificate prin tehnica RFLP -PCR prezintă r isc crescut de a
dezvolta sindromul metabolic pe loturile de sindrom metabolic, hipertensiune arterială și boala Alzheimer.

Key words: gena ACE, sindromul metabolic, hipertensiune arterial ă, boala A lzheimer .

1. Introduction
S-a constatat că structura genei
ACE (Angiotensin -Converting Enzyme ) e
obținută ca rezultat al dublării unei gene
ancestrale, iar exonii de la 4 la 11 și 17 la 24
codifică 2 domenii omoloage ale moleculei ACE
similare în dimensiuni și secvențe de ADN. Gena
ACE are o lungime de 21kb(kilo baze), este
alcătuită din 26 exoni și 25 introni [14]. La oameni
ACE este prezentă în două forme moleculare:
ACE1 și ACE2. ACE1 este localizată
germinal [3], expresia este înaltă în ileon, jejun,

Corresponding author: Stanislav Alexandra Alina, Dr. in
Biology, and medical biolog.
duoden, testicule, plamâni, vasele sanguine
pulmonare și prost ată[4]. ACE2 este localizată
somatic sau endotelial [3]. Izoenzima somatică
ACE este exprimată în multe țesuturi, inclusiv în
celulele endoteliale vasculare, celulele epiteliale
renale și în celulele testiculare Leydig [13]. ACE2
conține un potențial peptid de semnalizare
conținând 17 aminoacizi în domeniul N -terminal
și o presupusă regiune de ancorare la membrană
conținând 22 aminoacizi în domeniul C -terminal.
Are o secvență de consens de metaloprotează
dependentă de zinc și un reziduu de glutamină
conservat care se presupune că servește drept al
treilea ligand al zincului [22]. A fost exprimată
o formă solubilă, trunchiată, de ACE2 căreia îi D
DAVID PUBLISHING

Asocierea genei ACE cu sindromul metabolic, hipertensiunea arterială și boala Alzheimer prin RFLP -PCR

2
lipseau domeniile transmembranare și citosolice
în celulele CHO și s -a constatat că producea o
proteină glicozilată care poate scinda angiotensina
I și angiotensina II, dar nu și bradikinina. În
hidroliza angiotensinelor, ACE2 funcționează
exclusiv ca o carboxipeptidază [19]. ACE2, are
efecte directe asupra funcției cardiace, este
exprimată predominant în celulele endoteliale
vasculare ale inimii și rinichiului. În timp ce ACE
convertește angiotensina I în angiotensină II, care
are 8 aminoacizi, ACE2 convertește angiotensina
I în angiotensină I -9, care are 9 aminoacizi. În
timp ce angiotensina II este un puternic
constrictor al vaselor sanguine, angiotensina I -9
nu are niciun efect asupra acestora, însă poate fi
convertită de ACE într -o peptidă mai scurtă,
angiotensina 1 -7, care este un dilatator al vaselor
sanguine [2]. S-a semnalat că deficiența murină de
ACE2, care codifică o enzimă reglatoare esențială
a sistemului renină angiotensină(RAS) are ca
rezultat o susceptibilitate foarte crescută în
inflamația intestinală indusă de lezarea epitelială.
RAS este implicat în insuficiența pu lmonară
acută, funcțiile cardiovasculare și infecțiile c u
SARS (sindrom ul respirator acut sever )[5]. Gena
ACE este localizată pe brațul lung(q) al
cromozomului 17 în poziția 23.3. Localizarea
citogenetică a acestei gene este 17q23.3. Gena
ACE este localizată molecul ar pe cromozomul 17:
63,477,061 la 63,498,380 perechi de
baze[23](Fig.1) .

A B C
Fig.1. A) Localizarea genei ACE pe cromozomul
17 (după [24] ), B)Structura secundară, C)Structura terțială a genei care codifică enzima de conversie a
angiotensinei: Structura 3D a genei ACE(1o8o. pdb,
prelucrată prin VMD versiunea 1.9.1 Newcartoon).
ACE joacă rol important în reglarea
tensiunii arteriale [13], și în conversia
angiotensinei I decapeptid(inactiv) la
angiotensina II octapeptid(activ) [18].
ACE este o metalopeptidă de zinc larg
distribuită pe suprafața endotelială și celulele
epiteliale. ACE transformă inactiv o decapeptidă,
angiotensina I(Ang I sau Ang1 -10), la octapeptidă
activă, angiotensina II puternic
vasoconstrictor(Ang II sau Ang 1 -8), care este
principalul produs activ al siste mului
renină -angiotensină(RAS) .
S-a descoperit un polimorfism care
implică prezența sau inserția(I), absența sau
deleția(D) a secvenței de ADN de 287pb în
intronul 16 a genei ACE. Polimorfismul ACE ID
este asociat cu tul burări cardiovasculare [13].
Alela I a polimorfismului I/D al ACE pare a avea
un rol protecto r împotriva complicațiilor
DZ2(diabet z aharat de tip 2 )[9]. S-a detectat o
asociere semnificativă a polimorfismului ACE ID
cu tensiunea arterială sistolică( p=0,007) și
tensiunea arterială diastolică(p=0,026) cu valori
crscute la subiecții cu genotipul DD și valori
scăzute la subiecții cu genotipul II. Asocierea este
semnificativă și în concordanță cu afirmația că
polimorfismul ACE ID influențează variabilitat ea
presiunii arteriale la bărbați [20]. În anul 1996
Staessen și colaboratorii au observat că la
OR=1,10(95%CI=0,95 -1,27) prezintă risc
crescut de 10% de HTA la genotipul DD[14].
Polimorfismul ACE ID cu genotipul DD este
asociat cu un HDL -scăzut. În infa rctul
miocardic(MI) polimorfismul ACE ID al enzimei
ACE este asociat cu creșterea colesterolului total
și LDL -colesterol. Prezintă o asociere și cu IMC,
cu lipidele din sânge astfel că IMC căruia îi

Asocierea genei ACE cu sindromul metabolic, hipertensiunea arterială și boala Alzheimer prin RFLP -PCR

3
corespunde excesul de greutate corporală este mai
frecven t la pacienții cu genotip ACE ID decât
ACE DD, iar alela D a genei ACE este prezentă în
obezitatea abdominală. Genotipul DD al genei
ACE este asociat cu niveluri ridicate de colesterol
total, VLDL, LDL, TG și HDL scăzut. În
genotipurile homozigote și heter ozigote ale genei
ACE au fost identificate o asociere
interrelaționară cu factorii de mediu precum
tensiunea arterială sistolică și diastolică, fumatul
și DZ. Creșterea vârstei duce la scăderea
numărului de pacienți cu genotipul ACE II și
crește numărul ce lor cu genotipul ACE DD.
Genotipul ACE DD este prezent mai frecvent la
sexul masculin decât la sexul feminin, iar
genotipul ACE ID nu prezintă o asociere clară cu
lipidele din sânge și IMC. Polimorfismul ACE ID
joacă rol important în reglarea hemodinamică
umană și este asociat cu bolile multifactoriale [1].
Genotipul ACE DD este asociat cu fumatul fiind o
cauză a bolilor cardiovasculare. Genotipul ACE II
este asociat cu îmbătrânirea, aceasta se datorează
interacțiunii complexe genetice, epigenetice și
facto rilor de mediu, unde componenta genetică
are impact asupra supraviețuirii la vârste extreme.
Polimorfismul ACE ID este asociat cu bolile
cardiovasculare, DZ, nefropatie diabetică,
ateroscleroză, boli coronariene cardiace și
accident vascular cerebral, HTA, obezitate, boala
Alzheimer (BA), cancer și boala
Parkison(genotipul DD) iar genotipul II are și
efect puternic în longevitate [18].
În 1990 Rigat și colaboratorii au
identificat un polimorfism implicat în inserții(I) și
deleții(D) la 287pb secvențe denumind
polimorfismul ACE ID și a fost detectat prin
metoda PCR. Mai târziu detectarea
polimorfismului ACE ID s -a identificat prin
metodele PCR -Multiplex, RT -PCR dar și
DHPLC(denaturarea cromatografie lichidă de înaltă performanță) [18]. În rândul populației
Europei de sex masculin genotipul ACE DD a fost
întâlnit în populația țărilor precum Germania,
Danemarca, Franța, Rusia, Republica
Sakha(Yakutia) situată dincolo de Cercul Polar și
a fost identific ată prin metode de PCR și RFLP [1].
Bolile cardiovasculare reprezint ă princip ala
cauză de deces la bătrâni.A teroscleroza, bolile
metabolice:obezitatea și diabetul zaharat se
ascociază frecvent tulburărilor cardiovasculare.
Deteriorarea sistemului vascular al creierului
poate juca un rol esențial în boala Alzheimer,
eviden țiind potențialele legături dintre accidentul
vascular cerebral -AVC și demența de tip
Alzheimer.Mutațiile asociate cu boala
cardiovasculară(BCV), identificate la bătrâni este:
Enzima de conversie a angiotensinei (ACE) 287
BP inserție / deleți e (I / D): reprezintă un factor de
risc pentru infarctul miocardic la pacien ții în
vârstă și la fumători; alela D este asociată cu
activitatea ACE crescute în concentra țiile
plasmatice[2 1],[17].
Genotipul D / D și alela D al polimorfismului
ACE I / D au fost asociate cu un risc crescut în
dezvoltarea AD într -o populație tunisiană. Mai
mult, la momentul evaluării pacientului (vârsta
medie de 75 de ani), pacienții cu demență severă
au fost găsiți pr edominant la purtătorii D / D și,
invers, genotipul D / D și alela D au fost mai
frecvent găsiți la paci enții cu AD cu demență
severă [11].
Datele din literatura de specialitate sugerează
că polimorfismul ACE1 D / I poate fi considerat
ca un receptor în răs pândirea COVID19 (boala
coronavirus 2019) și în infecțiile pulmonare
cauzate de coronavirusuri [8].
Gena ACE2 este un receptor al SARS -CoV -2
(sindromul respirator acut sever coronavirus 2)
pentru COVID -19[7].

Asocierea genei ACE cu sindromul metabolic, hipertensiunea arterială și boala Alzheimer prin RFLP -PCR

4
Tehnica RFLP -PCR (polimorfismul
lungimii fragme ntelor de restricție), metoda se
bazează pe: detecția unui pattern cu restricție
alterată a produșilor ADN -ului genomic(Southern
Blot) sau PCR, iar tipul mutației detectate o
constituie mutațiile punctiforme, deleții mici și
inserții. Principiul tehnicii PCR(reacția de
polimerizare în lanț) este amplificarea
segmentelor ADN[ 10].
Metode statistice de interpretare a
datelor genetice
Legea Hardy -Weinberg (echilibrul
Hardy -Weinberg) are rol în interpretarea datelor
privind variabilitatea genetică în populațiile
naturale. Legea este o relație matematică simplă
între frecvența alelică și frecvența genotipică
pentru un locus autozomal, dintr -o populație cu
împerechere întâmplătoare, aflată în echilibru .
Odds Ratio, este o metodă matematică
de calculare a riscului de boală conferit de
genotipuri [15].
Software PyElph este un program
utilizat pentru analiza imaginilor și crearea de
arbori filogeneticii [12].
Software VMD(Visual Molecular Dynamics)
este un program utilizat pentru vizualizarea 3D a
moleculelor, a structur ii secundare și a structurii
terțiale a genei [6].
Scopul studiului este testarea asocierii dintre
polimorfismele genei ACE II, ID, DD și
sindromul metabolic, hipertensiunea arterială și
boala Alzheimer, pe baza datelor clinice și a
investigațiilor de labor ator biochimice la
pacienții din mediu spitalicesc prin tehnica
RFLP -PCR.

2. Materials and Methods
Pentru acest studiu au fost selectați 144 subiecți
din care: cu SM(n = 20), HTA(n=34), BA(n=18)
și subiecți controli, considerați clinic sănătoși(n = 72). Pentru acești subiecți s -au înregistrat date
clinice (ex.statutul de fumător și consumator de
alcool, IMC, tensiunea arterială) , și investigații de
laborator biochim ice: glicemia, trigliceridemia,
colesterolemia . Subiecții au fost selectați după ce
și-au exprimat consimțământul informal pentru
participare la studiu de la Spitalul Județean de
Urgență, Giurgiu. ADN genomic a fost izolat din
probele de sânge total și a f ost utilizat pentru
genotiparea polimorfismelor ACE II, ID, DD
prin tehnica RFLP -PCR, urmată de electroforeza
ampliconilor. Dimensiunea fragmentelor de
restricție: 335pb .
Separarea fragmentelor: gel de agaroză(2%).
Colorare:Bromură de etidiu.
Rezultatele au fost prelucrate statistic prin:
Echilibrul Hardy -Weinberg pentru distrib uția
frecvențelor genotipurilor :
; p+q=100%; p+q=1. Frecven țele
acestor genotipuri vor fi notate p2, 2pq, q2, fiind o
extensie a binomului: -distribu ția
genotipurilor se afl ă în echilibru genetic
Hardy -Weinberg. Valorile p<0,05 au fost
considerate semnificative din punct de vedere
statistic.
Calcularea și interpretarea Odds -Ratio
(calcularea riscului de boală conferit de
genotipuri ):

; OR=1;
OR>1 risc; OR<1 protecție [15].
Pentru prelucrarea datelor s -a utilizat următoarele
programe: software VMD . Visual Molecular
Dynamics versiunea 1.9.1 .-pentru vizualizarea
3D a moleculelor [6]; software StatsDirect
Statistical software [16], Software PyElph
versiunea 1.4 s-a utilizat pentru analiza
imaginilor și crearea de arbori filogeneticii [12].
S-a testat pe imagini de gel de agaroză
/poliacrilamidă în care moleculele de ADN au fost
colorate cu brom ură de etidiu care este un colorant

Asocierea genei ACE cu sindromul metabolic, hipertensiunea arterială și boala Alzheimer prin RFLP -PCR

5
fluorescent iar imaginiile au fost luate utilizând un
transiluminator cu UV și un aparat de fotografiat
digital comun. Modelul de markeri genetici
utilizați este tehnica RFLP -PCR.

3. Results and Discussion
S-a efectuat genotiparea polimorfismului
genei ACE ID, prin tehnica RFLP -PCR pe baza
ADN izolat din sânge și a determinării
spectrofotometrice a purității și concentrației de
ADN genomic. Rezultatele genetice au fost
prelucrate statistic prin echilibrul
Hardy-Weinberg, calcularea și interpretarea Odds
Ratio . A fost testată asocierea dintre
polimorfismul genei ACE ID și sindromul
metabo lic, pe un grup care a inclus 144 subiecți .
Pacienții selectați au avut trei(70,2%),
patru(23,4%) sau cinci(6,4%) caracteri stici ale
SM. Frecvența cu care au fost detectate
caracteristici ale SM în LSM (lot sindrom
metabolic ) sunt: hiperglicemia (85,81%),
HTA(72,34%), hipertrigliceridemia(63,83%),
HDL colesterolemia crescută(59,57) și IMC
crescut(53, 20%).
Numărul fumătorilor a fost mai mare în
LSM c omparativ cu LC (lot control ) (63,82% vs
23,75%; p<0,0001); fumatul este asociat
semnificativ cu SM (OR=5,66;
95%CI=2,57 -12,44).
Numărul consumatorilor de alcool în
LSM și LC a fost similar(21,28% vs 20%;
p>0,05). Valorile IMC, tensiunii arteriale,
glicemiei, triglice ridemiei și colesterolemiei au
fost semnificativ mai mari în lotul de pacienți cu
SM(p<0,0001).

Genotipurile ACE ID sunt distribuite – conform
condiției de echilibru Hardy -Weinberg.
– diferit în LSM și LC ( Fig.2).
A B
Fig.2.A)Imaginea unui gel de agaroză în care au fost
separați ampliconii care includ polimorfismul ACE
ID.Legendă : Liniile 1, 2, 6, 7: genotip ACE ID; Liniile
3, 4, 9: genotip ACE DD; Linia 8: genotip homozigot
ACE II; Linia 5: marker de greutate (100pb Ladder
Fermentas). B).Imaginea electroforezei pe agaroză
prin tehnica PCR -RFLP a genei ACE ID, prelucrată
utilizand softul PyElph prin metoda Nei bergoing .

a) Compararea datelor înregistrate pentru toți
subiecții din LSM și LC a evidențiat:
 Genotipul ACE DD – a fost identificat mult
mai frecvent în LSM comparativ cu LC
(p=0,0003 );
– apare din punct de vedere statistic ca un factor de
risc pentr u SM (OR DD=3,99,
95%CI=1,86 -8,55, Chi² =13,29 ).
 Genotipul ACE II – este mult mai frecvent
întâlnit în LC comparativ cu LSM ( p=0,02 );
– apare din punct de vedere statistic ca un factor
protectiv pentru SM (OR II=0,27; 95%CI
=0,09 -0,78, Chi² corectat Yat es=5,24 ).(Fig.3).

Fig.3.Distribuția genotipurilor ACE ID în LMS și LC.
(LMS(Genotipurile genei ACE ID sunt: DD=29,
0 20 40
LMS LC DD
ID
II

Asocierea genei ACE cu sindromul metabolic, hipertensiunea arterială și boala Alzheimer prin RFLP -PCR

6
ID=13, II=5), Controli(Genotipurile genei ACE ID
sunt: DD=23, ID=33, II=24).

Asocierea cu SM a fost mult mai redusă
dacă în analiza statistică s -a utilizat un model
dominant(DD+DI sau II+ID) comparativ cu
modelul recesiv (prezentat anterior).
Genotipurile ACE ID nu au fost asociate
cu vârsta la care a fost diagnosticat SM sau cu
parametrii biochimici identificați.
b) Compararea datelor după stratificarea
subiecților.
 Stratificarea pacienților în funcție de prezența
sau absența HTA a evidențiat următoarele:
 genotipul ACE DD a fost detectat mai frecvent la
pacienții cu SM care au HTA comparativ cu LC;
în acest caz asocierea genotip -fenotip a fost mai
puternică comparativ cu valoarea estimată pentru
LSM integral(OR DD = 4,54 ; 95%CI=1,93 -10,67,
p=0,0003).
 genotipul ACE DD a fost distribuit diferit în
cele două loturi, dar diferențele nu au fost
semnificative din punct de vedere statistic (p
corectat Yates=0,067).
 Stratificarea pacienților în funcție de prezența
sau absența altor caracteristici ale SM nu a
condus la rezu ltate semnificative din punct de
vedere statistic. (Fig.4 , Fig. 5).
 Asocierea dintre ACE ID și SM poate fi explicată
prin efectul polimorfismelor genetice asupra ratei
de sinteză a enzimei de conversie a
angiotensinei I în angiotensina II. Această
ipoteză poate explica asocierea mai puternică
dintre genotip -fenotip în cazul pacienților cu
SM care au și HTA .
A B
Fig.4.A)Imaginea unui gel de agaroză în care au fost
separați ampliconii care includ polimorfismul ACE
ID.Legendă : Liniile 1, 2, 6, 7: genotip ACE ID; Liniile
3, 4, 9: genotip ACE DD; Linia 8: genotip homozigot
ACE II; Linia 5: marker de greutate (100pb Ladder
Fermentas). B).Imaginea electroforezei pe agaroză
prin tehnica PCR -RFLP a genei ACE ID, prelucrată
utilizand softul PyElph prin metoda Neibergoing .

Fig.5.Distrib uția genotipurilor ACE ID în HTA și LC.
(LHTA (Genotipurile genei ACE I D sunt: DD=20,
ID=9 , II=5), Controli(Genotipurile genei ACE ID sunt:
DD=23, ID=33, II=16 ).

Pentru izolare a ADN -ului din sânge s -a folosit
un lot de 2 8 persoane dintre care 18 LBA (Lot
boala Alzheimer) și 10 LC; 18 persoane de sex
masculin și 10 persoane de sex feminine cu BA.
Persoanele incluse î n lotul analizat prin
cariotipare au fost analizate ș i din punctu de
vedere al polimorfismului ACE. Sâ ngele venos
recoltat pe EDTA a fost analizat prin metoda
RFLP . Rezultatele analizei a arătat că genotipul
ACE la persoanele care au prezentat f enotipul
CVD -comorbiditate cu BA cu genotipul DD a fost
prezent la 7 pacienți cu BA, genotipul ID a fost
prezent la 8 pacienți cu BA și genotipul II a fost
prezent la 3 pacienți cu BA(Fig.6.).
0 20 40
LHTA LC D
D
ID

Asocierea genei ACE cu sindromul metabolic, hipertensiunea arterială și boala Alzheimer prin RFLP -PCR

7

Fig.6.Genotipul ACE la persoanele care au prezentat
fenotip CVD – comorbiditate cu BA.
În general, s -a observat o corelație pozitivă între
prezenț a variantei polimorfice DD a genei ACE
cu BA.
În figura 7 este reprezentată electroforegrama
obținută în a naliza valorilor genotipice ACE la
pacienți cu BA. Forma DD este reprezentata
pentru 4 indivizi. Forma ID este reprezentata de
prezenta a 2 benzi (ampliconul 490pb si cel de
190 pb).
Fig.7.Electroforegrama reprezentand cele 3 forme
polimorfice tipice ale locusului ACE identificat la
diferiti indivizi.
Studiul de corelar e a genotipurilor ACE cu BA
și cu o boală vasculară(CVD) pe un lot de 18
persoane BA și 10 control i la vârste cuprinse
între 55 -70ani , a deter mina t rolul acestor
genotipuri în bolile vasculare și diabet .Genotipul
ID(OR=1,05). Genotipul DD și ID a fost asociat
cu BA. A vizat implicarea genotipurilor ACE,
într-un algoritm mai larg de gene care
influențează.CVD/diabet, obezitate, alături de
gena (gena APOE ) care în literatură este
considerată critică în boala Alzheimer .

4. Conclusions and Recommendations
Polimorfismele genei ACE II, ID, DD,
identificate prin tehnica RFLP -PCR prezintă risc
crescut de a dezvolta sindromul metabolic pe
loturile de sindrom metabolic, hipertensiune
arterială și boala Alzheimer.

Acknowledgement
I wish to express my gratitude to all those
people who provided qualified guidance and
effective support in carrying out this study: Professor Tatiana Vassu -Dimov PhD, scientific
coordinator of my doctoral thesis, Mr. Dănuț
Gheorghe Cimponeriu, Professor at the
Genetics Department of the Faculty of Biology,
Bucharest University, Ms. Natalia Cucu
Professor at the Genetics Department of the
Faculty of Bio logy, Bucharest University, Ms.
Ileana Stoica Professor at the Genetics
Department of the Faculty of Biology,
Bucharest University, Ms. Alexandra Simon 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900
P1
P4
P7
P10
P13
P16 ng/µl(initial)
ng/µl(dupa
dilutie)
PCR-ACE intron
16 ( I/D)
L-
Ladder(fragmente
ADN martor)

ID- heterozigot
(insertion/deletio
n)
DD- homozigot
(deletio nn)
II-
heterozigot
(insertion)

Asocierea genei ACE cu sindromul metabolic, hipertensiunea arterială și boala Alzheimer prin RFLP -PCR

2
Gruiță Professor at the Genetics Department
of the Faculty of Biology, Bucharest University
for allowin g me to use the facilities of the
Human Genetics Laboratory in conducting the
genetic tes ts, and Dr . PopescuGuinea Gelu,
head of the Diabetes, Nutrition and Metabolic
Diseases Section within the Internal Diseases
Department of Giurgiu County Emergency
Hospital, who indicated to me the clinical
criteria for the selection of patients with
metabolic syndro me, obesity and diabetes
mellitus, whose biological samples were
investigated in the Clinical Bacteriology
Laboratory of Giurgiu County Emergency
Hospital under the guidance of Dr. Matefi
Felicia, head of the laboratory, and Dr. Mihai
Petre, Manager of Giurgiu County Emergency
Hospital, who authorized my internship on a
volunteer basis (Volunteering Contract no.
2/20.01.2014), thus enabling me to gather the
biological material included in this study.
This study was conducted from
20.01.2014 -19.01.2015 and
20.01.2015 -19.01.2016 as part of a volunteer
activity at at Giurgiu County Emergency
Hospital (Volunteer Contract no 2/20.01.2014
and contract no 2/20.01.2015 subject to art.
13(5) of Law no 677/2001).

References
[1] Arkhipova N., Popova E., Grigorieva L., 2014,
The angiotension converting enzyme (ACE) gene I/D
polymorphism in different ethnic groups of geriatric age
living in the Far North 2014., SciRes. Vol.6.,
Nr.5.,426 -431(2014) Health , pag.426, 427, 428, 429.
[2] Boehm M., Nabel, E. G., 2002,
Angiotensin -converting enzyme 2 –a new cardiac
regulator. New Eng. J. Med. 347: 1795 -1797.
[3] Cheța D. M., Balaș B., Cimponeriu D. G.,
Panaite C., Vasilescu Ș. R., 2005, Vascular involvement in
diabetes Clinical, Experimental and B eyond Edited by
Dan Cheța Editura Academiei Române Karger
Basel -Freiburg Paris London New York Bangalore -Bangkok Singapore Tokyo -Sydney, pag.303,
304, 305, 451, 456.
[4] Harmer D., Gilbert M., Borman R., Clark K.
L., 2002, Quantitative mRNA expression profiling of ACE
2, a novel homologue of angiotensin converting
enzyme. FEBS Lett. 532: 107 -110.
[5] Hashimoto, T., Perlot, T., Rehman, A.,
Trichereau, J., Ishiguro, H., Paolino, M., Sigl, V., Hanada,
T., Hanada, R., Lipinski, S., Wild, B., Camargo, S. M. R.,
and 9 others. ACE2 links amino acid malnutrition to
microbial ecology and intestinal inflammation. Nature
487: 477 -481, 2012., PubMed: 2 2837003 , pag.477.
[6] Humphrey W., Dalke A., Schulten, K., 1996,
VMD – Visual Molecular Dynamics , J. Molec. Graphics,
1996, vol. 14, pp. 33 -38. VMD.versiunea 1.9.1.
[7] Jiewen Fu, Baix u Zhou,· Lianmei Zhang,
Kyathegowdanadoddi Srinivasa Balaji, Chunli Wei,
Xiaoyan Liu, Hanchun Chen, Jiangzhou Peng,
Junjiang Fu, Expressions and significances
of the angiotensin -converting enzyme 2 gene, the receptor
of SARS -CoV-2 for COVID -19,2020, Re ceived: 25 March
2020 / Accepted: 28 April 2020 © Springer Nature B.V.
2020, Molecular Biology Reports
https://doi.org/10.1007/s11033 -020-05478 -4, pag.2,3.
[8] Joris R. Delanghe, Marijn M. Speeckaert,
Marc L. De Buyzere, 2020, COVID -19 infections are
also affected by human ACE1 D/I polymorphism , Clin
Chem Lab Med 2020; aop,
https://doi.org/10.1515/cclm -2020 -0425, Received April
2, 2020; accepted April 3, 2020, pages 1 -2.
[9] Kajantie E., Rautanen A., Kere J ., Andersson
S., Yliharsila H., Osmond C., Barker D. J. P., Forsen T.,
Eriksson J., 2004, The effects of the ACE gene
insertion/deletion polymorphism on glucose tolerance and
insulin secretion in elderly people are modified by birth
weight., J. Clin. Endocr. Metab. 89: 5738 -5741, 2004.,
pag.5738.
[10] Kasper D., Fauci A., Longo D., Braunwald E.,
Hauser S., Jameson L., 2005, Harrison's principles of
internal medicine 16th edition traducere selectivă pentru
examenul de rezidențiat, Ministerul Sănătății -Centr ul
Național de perfecționare în domeniul sanitar Editura
Medicală, pag.43, 52, 54, 56, 57, 58, 61, 65, 68, 69,70.
[11] Najiba Fekih -Mrissa , Ines Bedoui , Aycha
Sayeh , Hajer Derbali , Meriem Mrad , Ridha
Mrissa , Brahim Nsiri , 2017, Associ ation between an
angiotensin -converting enzyme gene polymorphism and
Alzheimer’s disease in a Tunisian population, PMC.
Journal List , Ann Gen Psychiatry , v.16; 2017 , Ann Gen
Psychiatry . 2017; 16: 41. , Published online 2017 Nov
17. doi: 10.1186/s12991 -017-0164 -0,

Asocierea genei ACE cu sindromul metabolic, hipertensiunea arterială și boala Alzheimer prin RFLP -PCR

3
PMCID: PMC5693601, PMID: 29176997 ,
https://www.ncbi .nlm. nih.gov/pmc/articles/PMC5693601
[12] Pavel A.B, Cristian V., 2012, PyElph -a
software tool for gel images analysis and phylogenetics .,
BMC Bionformatics., 13:9. software -ul PyElph
versiunea 1.4. http://sourceforge.net/projects/pyelph/
[13] Ramaraj P., Kessler S. P., Colmenares C., Sen
G. C., 1998, Selective restoration of male fertility in mice
lacking angiotensin -converting enzymes by sperm -specific
expression of the testicular isozyme. J. Clin. Inve st. 102:
371-378, 1998.
[14] Saved -Tabatabaei F.A., Oostra B.A., Isaacs
A., Van Duijn CM., Witteman J.C., 2006, ACE
polymorphisms , Review Circulation Research,
2006:98:1123 -1133., pag.5, 6, 7, 8.
[15] Simon -Gruiță Alexandra, 2007 , Introducere în
genética populațiil or, Editura Universității din București
pag 33 -34.
[16] software StatsDirect Statistical software,
versiunea 2.8.0, StatsDirect Ltd, Cambridge, UK, 27th
October 2013, www.statsdirect.com
[17] Stanislav Alexandra Alina, Cucu Natalia,
2013, Studiul factorilor de risc în Boala Alzheimer.
Lucrare de disertație , Universitatea din Bucuresti,
Facultatea de Biologie, Masterul de Biotehnologie
Microbiană și Genetică; pag.43.
[18] Syed Kashif Nawaz, Shahida Hasnain, 2009,
Pleiotropic efects of ACE polymorphism , Biochemia
Medica 19(1):36 -49, pag.2.,
http://www.biochemia -medica.com/content/pleiotropiceff
ects-ace-polymorphism
[19] Tipnis S. R., Hooper N. M., H yde R., Karran
E., Christie G., Turner A. J., 2000, A human homolog of
angiotensin -converting enzyme: cloning and functional
expression as a captopril -insensitive carboxypeptidase .,
J. Biol. Chem., 275: 33238 -33243, 2000.
[20] Uemura K., Nakura J., Kohara K., Miki T.,
2000, Association of ACE I/D polymorphism with
cardiovascular risk factors., Hum. Genet., 2000 Sep:
107(3):232 -42., pag.232.
[21] http://www.viennalab.com/genetic -mutation -t
reatment -syndrome -prevention -molecular -biology/geneti
c-disorders -genetic -diseases -genetic -testing/cardio logy-c
oronary -myocardial -infarction -stroke -factor -v-leiden -pth-
mthfr broșură CVD strip assay
[22] www.omim.org.+106180
[23] https://ghr.nlm.nih.gov/gene/ACE
[24] http://g hr.nlm .nih.g ov