2.3.1.Bacillus amyloliquefaciens 2.4. MECANISME DE ACȚIUNE A MICROORGANISMELOR ANTAGONISTE 3. CERCETĂRI ROMÂNEȘTI ÎN DOMENIU 4. STUDIU EXPERIMENTAL… [305405]

CUPRINS

INTRODUCERE

1. MICROORGANISME FITOPATOGENE

1.1. BACTERII FITOPATOGENE

1.2. MUCEGAIURI FITOPATOGENE

2. MICOORGANISME ANTAGONISTE

2.1. MUCEGAIURI

2.2. DROJDII

2.3. BACTERII

2.3.1.Bacillus amyloliquefaciens

2.4. MECANISME DE ACȚIUNE A MICROORGANISMELOR ANTAGONISTE

3. CERCETĂRI ROMÂNEȘTI ÎN DOMENIU

4. STUDIU EXPERIMENTAL

4.1. MATERIALE ȘI METODA

4.2. REZULTATE

4.3. ANALIZA STATISTICĂ

5. [anonimizat].

[anonimizat], fie în timpul depozitării.

[anonimizat], vârsta fiziologică și mecanismele de apărare ale gazdei. [anonimizat], prin menținerea naturii rezistenței gazdei și prin întârzierea senescenței. [anonimizat] a proteja produsul de infecțiiile fungice. Aplicarea fungicidelor sintetice a [anonimizat], deși utilizarea lor a [anonimizat] a depăși rezistența deja dezvoltată de agenții patogeni față de pesticidele vechi. [anonimizat] s-au intensificat cercetările în căutarea altor alternative.

Controlul biologic cu ajutorul antagoniștilor microbieni a atras un mare interes ca un mijloc alternativ la utilizarea produselor chimice. [anonimizat] o mare variabilitate a [anonimizat], [anonimizat] a lui Korsten (2002), primele abordări utilizate pentru a [anonimizat]: [anonimizat], fiziologici și manipularea genetică a antagoniștilor, [anonimizat], și integrarea prin utilizare a altor metode nebiologice.

Spadaro și Gullino (2004) au declarat că mijloacele biologice trebuie să fie în prezent considerate instrumente care trebuie utilizate în combinație cu alte metode într-o viziune integrată a [anonimizat].

1. [anonimizat], fapt care le conferă un pleumorfism accentuat.

Calitatea agenților fitopatogeni de a ataca plantele și de a [anonimizat] a accepta acțiunea unui agent străin.

1.1. [anonimizat], cu dimensiuni cuprinse între 0,6-4μ lungime și 0,3-1,4μ lățime. (figura 1.1.)

Bacteriozele sunt boli infecțioase care se manifestă la toate organele plantei având efect local și generalizat.

Figura 1.1. Tipuri de bacterii fitopatogene a) atriche; b) monotriche; c) amphitriche; d,e) lophotriche; f) peritriche (după E. Rădulescu)

Principalele bacterii fitopatogene aparțin genurilor Mycoplasma, Agrobacterium, Pseudomonas, Xanthomonas, Erwinia, Clavibacter și Streptomyces.

Clasificarea bacteriilor fitopatogene după Garrity et.al, 2007 este redată în tabel 1.1.

Tabel 1.1. Bacterii fitopatogene

Sursa: Garrity et al., 2007; http://www.taxonomicoutline.org/

Bolile produse de bacteriile fitopatogene sunt redate în tabelul 1.2.

Tabel 1.2. – Boli produse de bacteriile fitopatogene

1.2. MUCEGAIURI FITOPATOGENE

Sunt microorganisme de tip eucariot, monocelulare sau pluricelulare, diferențiate din punct de vedere morfologic și care se reproduc prin spori formați numai pe cale asexuată sau pe cale mixtă (asexuată și sexuată).

Aspergillus carbonarius

Aspergillus carbonarius se caracterizează prin vârfuri foarte lungi și conidii mai mari decât orice altă specie de Aspergillus cu spori negri, formează colonii de culoare brun-negru mai mari decât cele ale A.niger. (figura 1.2.) și figura 1.3 – Boabe de strugure infestate cu Aspergillus carbonarius.

Aspergillus carbonarius seamănă cu A. niger la multe caracteristici, și cele două specii sunt foarte strâns legate, dar diferă de A. niger mai ales în producția de spori care sunt mai mari, deși există și alte diferențe morfologice minore.

Recent, aspergillii negri, în principal Aspergillus carbonarius și membri ai agregatului Aspergillus niger, au fost descriși ca fiind principalele surse posibile de contaminare cu ochratoxină (OTA) în struguri din Argentina, Brazilia, Franța, Italia, Spania, Portugalia, Grecia și Australia ca și în strugurii uscați de diferite origini. S-au raportat, de asemenea, dovezi puternice privind contribuția A. carbonarius la contaminarea cu OTA a vinului. Ochratoxina A este un metabolit foarte dăunător clasificat în 1993 de către Agenția Internațională pentru Cercetare a Cancerului (IARC, 1993) ca o posibilă toxină carcinogenă umană (grupul 2B).

Fig. 1.2. – Aspergillus Carbonarius

Sursa – https://genome.jgi.doe.gov/Aspca3/Aspca3.home.html

Fig. 1.3 – Boabe de strugure infestate cu A. carbonarius

Sursa – Dimitrios I.-Biological control strategies of mycotoxigenic fungi and associated mycotoxins in Mediterranean basin crops,2016

Aspergillus niger

Specia Aspergillus niger formează colonii radiale de culoare brun-negru, prezintă două rânduri de fialide pe toată suprafața veziculei, capul conidial este sferic. Are aspect pufos, de culoare neagră, cu marginea albă. (figura 1.3.) și figura 1.4.

Fig. 1.3. A) Conidiori tip Aspergillus cu cap radial; (B) colonie întunecată de

Aspergillus niger; (C și D) rotunjite, conidii rotunde cu crestături și bare regulate scăzute.

Sursa – Quistorp-Santos și colab., 2013

. 1.4. Bulb de ceapă infestat cu spori de A. negri

Sursa- http://mtvernon.wsu.edu/path_team/DiseaseGallery/onion-black-mold-1.htm

Specia Aspergillus niger este folosită pentru obținerea de enzime: amilaze, proteaze, glucozoxidaze, invertaze, enzime pectolitice sau pentru obținerea acizilor organici: acid citric, acid lactic, gluconic.

Aspergillus niger după recoltare, atunci când condițiile de depozitare o permit invadează piersicile, caisele, ceapa și varza producând un miceliu negru, degradarea este favorizată de umiditatea ridicată și temperaturile mari (Jay et al., 2005).

Botrytis cinerea

Miceliul din Botrytis cinerea este ramificat, septat, hialin culoare cenușie, conidioforii care apar direct din miceliu sau din sclerotia, sunt înalți, subțiri, ramificați neregulat în porțiunea terminală, cu celule apicale mărite sau rotunjite, care produc uneori sclerote neregulate. Conidiile sunt netede, hialine sau gri, în formă de ou, cu o lungime medie de 10 μm și lățime medie de 5 μm (Barnett și Hunter, 1998) (fig. 1.5. Germinarea conidiei Botrytis cinerea și figura 1.6. Căpșuni infestate cu mucegaiul gri)

Figura 1.5. Germinarea conidiei Botrytis cinerea (A); Efectele PDA modificate cu chitosan asupra creșterii radiale a Botrytis cinerea. (B) Control (sus stânga), 0,12% chitosan (sus-sus), 0,25% chitosan (partea stângă în partea de jos) și 0,50% chitosan dreapta).

Sursa- Gianfranco Romanazzi and Erica Feliziani, Botrytis cinerea (mucegaiul cenușiu)

Figura 1.6. Căpșuni infestate cu mucegaiul gri

Sursa- https://www.forestryimages.org/browse/detail.cfm?imgnum=1568096

Poate produce mucegaiul gri al merelor, perelor, zmeurei, căpșunilor, strugurilor, citricelor cât și a altor fructe cu sâmburi. Poate să apară înainte de recoltare, în timpul recoltării și după recoltare pe perioada de depozitare fiind influențată apariția sa de creșterea umidității, curenții de aer, cât și de temperatură.

Alternaria alternate

Formează micelii septate cu conidiofori și conidii cafenii mari. Alternaria alternate formează lanțuri conidiale cu șase până la 14 conidii în lungime și dezvoltă numeroase lanțuri secundare și ocazional terțiare la opt conidii în lungime. Coloniile sunt pufoase. Se mai numește și mucegaiul de câmp fiind găsit pe suprafața semințelor recoltate proaspăt.(fig. 1.7.)

Figura 1.7, Morfologia Alternaria alternata (A) Colonii de Alternaria alternata crescute pe cartof și dextroză agar. (B) Lanțurile conidiale și ramificația lanțului Alternaria alternata (C) Conidia la × 40. (D) Conidia la × 100.

Sursa -Barry Pryor, (Plant Patology, Universitatea din Arizona, Tucson, Arizona, SUA.)

Poate produce pătarea neagră a frunzelor (figura 1.8), plantele pot fi afectate în toate fazele de dezvoltare, boala manifestându-se pe tulpină, frunze și fructe.

Figura 1.8. Pătarea neagră a frunzelor

Sursa- https://en.wikipedia.org/wiki/File:Alternariaalternata.jpg

Penicillium expansum

Genul Penicillium a fost descris pentru prima dată în literatură de John H. F. Link (1767-1851), un micolog și profesor de botanică la Rostock, Breslau și Berlin în 1809. În lucrare sa, Link a descris trei specii de genul Penicillium, P. candidum, P.expansum și P. glaucum toate care au produs conidiofori asemănători periilor (Link, 1809). Conidioforele sunt perii denși, structuri purtătoare de conidia, sunt simple sau ramificate și sunt terminate de grupuri de fialide în formă de balon. Conidiile sunt aproape întotdeauna verzi. (fig.1.9)

Figura 1.9. (A) Colonia Penicillum expansum pe mediul agar de dextroză de cartof și (B) fotomicrograf al conidiophorului P. expansum care prezintă capete conidiale terverticilate și conidia. Sursa – K. Seifert, ECORC, AAFC, Ottawa) × 100

Figura 1.10. Mere atacate de mucegaiul albastru

Sursa- https://www.researchgate.net/figure/An-apple-contaminated-by-Penicillium-expansum_fig1_51785382

Penicillium expansum provoacă mucegaiul albastru la măr, iar după recoltare afectate de această ciupercă sunt fructele climaterice care pot fi depozitate o perioadă lungă de timp în condiții optime, perioadă care este similară cu maturitatea fructelor. Maturitatea la recoltare este unul dintre factorii importanți care determină stocarea, viața și calitatea finală a fructelor pentru depozitarea pe termen lung a acestora, în special pentru mere și pere. Unele dintre standardele de calitate necesare pentru fructele proaspete includ indicii obiectivi de maturitate cum ar fi: concentrația solidă solubilă, aciditatea titratabilă, raport al concentrației solide solubile și aciditatea titrată și fermitatea cărnii. Fructul luat prea devreme sau prea târziu este predispus la descompunere și infecție cu agenți patogeni. Fructele care au fost recoltate în condiții necorespunzătoare au fost atacate de Penicillium expansum.

A fost izolat și de pe căpșuni și tomate. Apare pe cereale mai puțin frecvent decât alte specii ale genului. Foarte răspândit pe alimente cum sunt carnea și produsele din carne. Produce micotoxine de tipul patulinei și citrininei.

Fusaryum oxsiporum

Formează un miceliu închis cu aspect vătos cu nuanțe de roz, roșu, purpuriu sau cafeniu. Macroconidiile sunt septate având forma fusiformă până la falciformă (în formă de seceră)(fig.1.11).

Figura 11. Fusaryum oxysporum. A-C: Morfologia coloniei pe mediul de agar de dextroză din cartof, A: Culoarea coloniei roz, B: Creșterea albă pufoasă, C: Pigmentarea violet închis pe suprafața inferioară a plăcii; D: Macro-conidia; E: Microconidia de formă ovală cu o singură celulă și 2-celulare; F: celule conidiogene; G-I: Formarea de Chlamydospores, G: Singur, H: Perechi, I: Lanțuri scurte; D-I, bare de scară = 25 μm. .(Rafique et al.,2015)

Sursa-https://www.researchgate.net/figure/Fusarium-oxysporum-A-C-Colony-morphology-on-potato-dextrose-agar-medium-A-Pinkish_fig1_289208291

Fusarium oxysporum este o ciupercă patogenă comună în solurile din întreaga lume, și care cauzează un sindrom mortal de ofilire și uscare la plante. Fusarium oxysporum cuprinde peste 120 de specii cunoscute sau "forme speciale" (formae speciales; f. Sp.), Fiecare dintre acestea fiind specifice unei gazde unice de plante în care provoacă boala. În mod colectiv, aceste tulpini de Furarium oxysporum infectează și ucid o gamă largă de gazde, incluzând multe culturi recoltate comercial, cum ar fi speciile din familia Solenaceae (roșii, ardei, cartofi, vinete), salată, leguminoase, sfeclă, busuioc, căpșuni, crizanteme, trestia de zahăr, bananele și multe alte specii. După Gonsalves și Ferreira 1993; Miller și colab., 1996, New York Botanical Garden 2003, Wikipedia 2014a, b sporii de Fusarium oxysporium supraviețuiesc latenți în sol, uneori timp de 30 de ani, se pot răspândi ușor în apă, pe mașini și semințe și se pot ascunde în rizomi sau în butașii vegetativi ai plantelor infectate, fără simptome până când nu sunt transmise altor plante; toate acestea sunt calități care fac din această ciupercă un dăunător agricol important și un potențial devastator.

Fusarium oxysporium poate provoca la cartofii depozitați putrezirea uscată, pe suprafața lor apare un miceliu alb-roz și în condiții de lipsă de aer, tuberculii se zbârcesc, se întăresc, iar miezul lor se brunifică, treptat aceștia se usucă și iau aspectul unei mase gălbui, pulverulente. În tuberculii în care se dezvoltă aceste mucegaiuri se formează unele fuzariotoxine dăunătoare sănătății omului și animalelor.

Fusarium oxysporium (roseum) atacă în principal merele și perele după recoltare, oferindu-le un gust amar. Când fructele se păstrează în spații umede alterarea uscată se poate transforma în una umedă. În urma dezvoltării, aceste mucegaiuri elaborează numeroase toxine-fusariotoxine dăunătoare consumatorilor.

Figura 1.12- Tomate atacate de Fusaryum oxisporum

Sursa-https://www.forestryimages.org/browse/detail.cfm?imgnum=1436102

Rhizopus Geotrichum

Hifele sunt aseptate produc stoloni și rizoizi. Sporangioforii se dezvoltă tipic sub formă de ciorchine în capul stolanilor la punctul de origine al rizoizilor. Colonia crește repede datorită formării unor lăstari micelieni numiți stoloni.(figura 1.13).

Figura 1.13 Rhizopus geotrichum

Sursa- http://thunderhouse4-yuri.blogspot.ro/2010/06/rhizopus-species.html

Genul Rhizopus cauzează mucegaiurile pâinii și putregaiuri moi ale fructelor și legumelor, altele produc pete negre pe carnea congelată de vită și de oaie. Pot fi găsite pe slănină și pe alte produse din carne procesate.

2. MICOORGANISME ANTAGONISTE

În fitopatologie, antagonismul se referă la acțiunea oricărui organism care suprimă sau interferează cu creșterea și activitatea normală a unui patogen vegetal, cum ar fi părțile principale ale bacteriilor sau ciuperci.

Aceste organisme pot fi utilizate pentru controlul dăunătorilor și sunt denumite "agenți de control biologic". Acestea pot fi prădători, paraziți, parazitoizi sau agenți patogeni care atacă insectele dăunătoare, buruienile sau bolile plantelor sau orice alt organism din vecinătatea sa. Multe microorganisme din sol sunt antagoniste, secretă o enzimă puternică care distruge alte celule prin digerarea pereților celulari și degradarea materialului celular, precum și a materialului protoplasmic eliberat servește ca un nutrient pentru organismul inhibitor, de exemplu Aspergillus are un efect antagonist asupra Penicilliului și Cladosporium, Trichoderma are un efect asupra Actinomictelor. Pseudomanasul prezintă antagonism asupra Cladosporium.

Interesul pentru metodele noi de conservare biologică a crescut în ultimii ani, susținut de cercetări care arată că microorganismele antagoniste sau metaboliții lor antimicrobieni pot avea un potențial de conservanți naturali pentru a controla creșterea bacteriilor patogene din alimente și pentru a controla fungii micotoxinogeni. Până în prezent, nisin este singurul bacteriocin care a găsit aplicații practice în unele alimente prelucrate industrial. Multe bacteriocine din bacteriile cu acid lactic au fost recent caracterizate, însă eficacitatea lor în alimente nu a fost studiată extensiv. O mai bună înțelegere a interacțiunilor dintre metaboliții antimicrobieni și componentele alimentare este necesară pentru evaluarea potențialului lor de conservanți.

Pentru că țările importatoare au impus restricții privind reziduurile de pesticide pe fructele proaspete, cercetările au crescut în privința tratamentelor de biocontrol pentru a înlocui aplicațiile fungicide.

Agenții biocontrolici sunt de obicei microbi nonpatogeni, cum ar fi ciuperci, bacterii sau antagoniști de drojdie. În general, agenții de biocontrol sunt recomandați mai degrabă pentru tratamentul post-recoltare decât pentru aplicarea pe câmp, deoarece mediul de stocare poate fi controlat pentru a favoriza creșterea antagonistului. Atmosferele controlate sau atmosferele modificate pot favoriza creșterea unui antagonist de drojdie.

De-a lungul anilor, fungicidele sintetice sunt utilizate în primul rând pentru a controla descompunerea post-recoltare a fructelor și legumelor din cauza eficacității lor și a costului redus. Cu toate acestea, sănătatea și siguranța fungicidelor sintetice ca agent de control biologic în alimentele delicate cum ar fi fructele și legumele, precum și impactul asupra mediului natural au creat preocupări legale și de consum. Cu toate acestea, aceasta a cerut o alternativă mai sigură și mai ecologică pentru controlul decăderilor post-recoltare în fructe și legume. Aplicarea microorganismelor antagoniste ca alternativă pentru a rezolva provocările în controlul bolilor post-recoltare în fructe și legume devine din ce în ce mai populară pe plan mondial. Mecanismul (mecanismele) prin care antagoniștii microbieni suprimă bolile post-recoltare este încă necunoscut, însă concurența pentru nutrienți și spațiu, producerea de anticorpi, parazitismul direct și rezistența indusă sunt mecanismele cele mai acceptate ale acțiunii lor. Antagoniștii microbieni sunt aplicați fie înainte, fie după recoltare, dar aplicațiile post-recoltare sunt mai eficiente decât aplicațiile pre-recoltare.

Noua schimbare de paradigmă propusă în cercetarea privind biocontrolul include integrarea fungicidelor chimice cu risc scăzut, a substanțelor antimicrobiene naturale și a mijloacelor fizice cum ar fi tratarea apei calde, iradierea cu lumină ultravioletă, cuptorul cu microunde și tratamentul în infraroșu în procesul de bio-control; amplificarea exprimării genelor de control biotic și/sau combinarea genelor provenite de la diferiți agenți de biocontrol în producția, formularea și stocarea în masă sau ca răspuns la expunerea și contactul cu țesutul gazdă- gazdă după aplicare; utilizarea organismelor modificate genetic ca agenți de biocontrol; și cercetarea spre descoperirea de noi antagoniști în locul celor utilizate în prezent în practică.

Antagonismul microorganismelor (de asemenea, antibiotice), suprimarea unor specii de microorganisme de către altele observat în primul rând, de L. Pasteur în 1877, apare frecvent în natură. Sub influența antagoniștilor, microorganismele încetează să crească și reproducă în unele cazuri, celulele lor se lizează sau se dizolvă în alte cazuri sau astfel de procese biochimice în celule, deoarece respirația și sinteza aminoacizilor devin inhibate sau încetează în alte cazuri. Antagonismul este cel mai pronunțat printre actinomycete, bacterii și ciupercile.

Pseudomonas aeruginosa suprimă în mod activ microorganismul de ciumă. Actinomicitele, care produc nistatină, inhibă creșterea drojdiilor. Antagonismul este observat, de asemenea, printre alge și protozoare. Mecanismul antagonismului este variat și adesea obscur. Antagoniștii, de cele mai multe ori, nu acționează asupra concurenților lor cu produse metabolice (alelopatie), inclusiv antibiotice, sau îi distrug pe concurenți prin intermediul unei reproduceri mai intense sau al utilizării primare a alimentelor. Tentative repetate au fost făcute încă din secolul al XIX-lea de către V. A. Manassein (1871), A. G. Polotebnov (1872) și alții pentru tratarea bolilor cauzate de bacterii; totuși, aceste încercări au fost nereușite datorită utilizării preparatelor nesterile.

Antagoniștii microbieni sunt utilizați pe scară largă în producerea de antibiotice. Antagoniștii influențează în mare măsură fertilitatea solului. Prin dezvoltarea luxuriantă a solului, antagoniștii microbieni utili inhibă creșterea multor bacterii și ciuperci fitopatogene, dezinfectând astfel solul. Antagoniștii pot fi utilizați în multe ramuri ale industriei alimentare.

2.1. MUCEGAIURI

S-a demonstrat prin diverse studii că Pseudomonas sp. are acțiune antimicotică asupra genurilor Gaumannomyces, Pythium sp., Rhizoctonia și Thielaviopsis.

Efecte pozitive în combaterea virusurilor s-au observant în urma unor experimente a avea enzimele și metaboliții emiși de: Streptomyces, Lactobacillus sp., Nanocystis sp., Polyangium sp., Wolinella, Myxoccoccus, Stigmatella și Erwinia.

Speciile genului Trichoderma și biopreparatele pe bază de Trichoderma s-au dovedit a fi eficace în combaterea ciupercilor din genurile Actinomucor, Aspergillus, Botrytis, Corticium, Erysiphe, Fomes, Ganoderma, Helicobasidium, Lenzites, Merulius, Nectria, Phoma, Pythium, Rhizopus, Sclerotium, Tilletia, Ustilago, Venturia etc.

Trichothecium roseum și Gliocladium roseum sunt active ca antagoniști la peste 20 specii de ciuperci fitopatogene și mai ales asupra speciilor genului Monilinia.

În sol, bacteriile din grupul Trichoderma lignorum, Trichoderma viride, Trichoderma

harzianum, Pythium oligandrum, Coniothyrium minitans, Trichothecium roseum, Chaetomium globosum, Pseudomonas fluorescens sunt eliminate prin concurența nutritivă și mai ales prin antagonism. Microorganismele saprofite din sol elimină numeroase substanțe antibiotice, care inhibă sau distrug diferite bacterii patogene. Unele protozoare se hrănesc cu astfel de bacterii (Erwinia carotovora), determinând reducerea numărului acestora. Bacteriofagii au acțiune de distrugere și în sol a bacteriilor fitopatogene.

Sușele avirulente de Fusarium oxysporum odată instalate nu mai permit atacul sușelor virulente de la același patogen.

Erwinia herbicola ocupă nișa ecologică și din această cauză Erwinia amylovora nu mai poate parazita.

Trichoderma viride inhibă dezvoltarea unor ciuperci din sol: Rhizoctonia solani Kühn, Phytophthora nicotianae var. parasitica (Dastur) G.M. Waterh., Pythium sp., Rhizopus sp., Sclerotium rolfsii Sacc. ceea ce a determinat o intensificare a cercetarilor în domeniul utilizarii ciupercilor antagoniste în protectia plantelor (Sesan, 2005).

Literatura de specialitate subliniază unele încercări de utilizare a ciupercilor antagoniste și microparazite ca mijloc biologic de inhibare a patogenului Botrytis cinerea, cum sunt: Trichoderma viride, Trichothecium roseum, Gliocladium roseum (Coley-Smith, 1980) și Coniothyrium minitans (Ervio, 1965).

De asemenea, Pseudomonas fluorescens și Pseudomonas syringae au un remarcabil spectru larg al activitāții de biocontrol împotriva câtorva patogeni din sol care atacā cultura de plante mono și dicotiledonate.

Un antagonism mai evidențiat au manifestat tulpinile de Penicillium față de Alternaria alternata, Fusarium solani și Fusarium oxysporum.

Inhibarea ciupercilor Verticillium albo-atrum și Rhizoctonia solani, parazite pe bumbac, se practică de peste 30 de ani în China, folosind ca antagonist o sușă avirulentă de Streptomyces selecționată prin mai multe testări din gama de bacterii existente în solurile cultivate.

În anii 2007 și 2008 Dianpeng Zhang, Davide Spadaroa,b, Angelo Garibaldia, Maria Lodovica Gullinoa au obținut tulpina AP6 ce a fost identificată ca Pseudozyma fusiformata, tulpina AP47 ca Metschnikowia sp., și tulpina PL5 ca Aureobasidium pullulans. care prezintă cea mai mare eficacitate de biocontrol împotriva lui Monilinia laxa pe piersici. Acest studiu a identificat aceste microorganisme antagoniste, cu exploatare potențială ca ingredient active pentru dezvoltarea unor produse pentru controlul post-recoltare a putregaiului brun pe piersici.

2.2. DROJDII

Kinay și colab., 2001; Papadopoulou-Mourkidou, 1991; Usall și colab., 2001; Zhou și colab., 2002 au făcut cercetări prin care au demonstrat că Saccharomyces cerevisiae (ACB-K1 și ACB-CR1) și Bacillus subtilis (ACB-69 și ACB-84) pot efectua în mod diferit sau împreună controlul mucegaiului verde (Penicillium digitatum), în funcție de varietatea de citrice. Ambele drojdii au controlat mucegaiul verde în fructul "Tahiti" cu 40% când a fost folosit ca tratament curative.

2.3. BACTERII

S-a demonstrat că B. subtilis și B. mojavensis au o activitate antimicotică puternică, în special împotriva C. albicans. Această inhibare a creșterii este probabil datorată producției de enzime de degradare a peretelui celular și a diferitelor familii de lipopeptide, inclusiv iturine, fengycins și surfactins.

Printr-un studiu s-a arătat că nu numai B. subtilisstrain ABS-S14 și antibioticele sale prezintă o puternică caracteristică antagonistă față de creșterea P. digitatum, iar chitosan a inhibat, de asemenea, în mare măsură creșterea P. digitatum atât in vitro, cât și in vivo.

Bacillus licheniformis N1, care a, fost investigat pentru a dezvolta o acțiune biofungicidă pentru controlul mucegaiului gri cauzat de Botrytis cinerea pe roșii, a prezentat un potențial de agent de control biologic.

Anumite tulpini de tip Bacillus amyloliquefaciens, B. subtilis, B. pasteurii, B. cereus,B. pumilus, B. mycoides și B. sphaericus determină importante reduceri în incidența sau severitatea diferitelor boli legate de diversitate.

Un alt studio a utilizat două bacterii, tulpina Ag1 (Ag) de Bacillus amyloliquefaciens și tulpina Cs5 (Cs) Burkholderia cepacia, pentru a li se verifica potențialul de a controla boala cauzată de Fusarium oxysporum în materialul săditor de (Phoenix dactylifera L), boala–Bayoud. Ambele tulpini bacteriene au inhibat atât creșterea cât și sporularea lui Fusarium oxysporum.

Într-un alt studiu Bacillus amyloliquefaciens PPCB004 a fost selectat ca un antagonist potențial pentru a controla Botrytis cinerea, Penicillium expansum și Rhizopus stolonifer pe fructele de piersici.

Bacteriile solului, CWBI-B1567 și CWBI-B1568, izolate din regiunile aride și identificate ca Bacillus subtilis (număr de acces KC341751) și Bacillus mojavensis (număr de acces KC341749) au fost analizate și evaluate pentru activitatea lor antifungică împotriva Candida albicans, unul dintre ei cei mai importanți agenți patogeni umani fungici.

2.3.1.Bacillus amyloliquefaciens

Bacillus amyloliquefaciens este o bacterie sol de gram pozitiv strâns legată de specia Baciullus subtilis. Priest, F., Goodfellow, M., Shute, L., and Berkeley, R. 1987 a emis concluzia că cele două specii au multe gene omoloage și apar atât de asemănătoare încât nu este posibilă separarea vizuală a celor două specii. Roberts, R., Wilson, G., and Young, F. în 1977 descoperă că această specie este, de asemenea, sursa enzimei de restricție BamHI disponibilă comercial, care taie la CGATCC palindrom.

Structura, metabolismul și ciclul de viață

Bacillus amyloliquefaciens (figura 1.14) sunt tije gram pozitive cu flagel peritrich care permit motilitatea. Celulele apar adesea ca lanțuri lungi spre deosebire de multe alte specii de Bacillus care formează celule singulare. Temperatura optimă pentru creșterea celulară este între 30°-40° de grade Celsius. Similar cu alte specii de Bacillus, B. amyloliquefaciens formează endospori care permit supraviețuirea pentru o perioadă lungă de timp. Endosporele apar central în celulele care nu au un aspect umflat. (Priest, F., Goodfellow, M., Shute, L., and Berkeley, R. 1987)

Figura 1.14- Bacillus amyloliquefaciens

Sursa- https://alchetron.com/Bacillus-amyloliquefaciens#-

Ecologie și patogeneză

Bacillus amyloliquefaciens este o bacterie nepatogenă a solului. Similar cu alte specii de Bacillus, B. amyloquefaciens este capabil să producă endospori, permițându-i să supraviețuiască pentru perioade lungi de timp. Caldeira A. et. al. în 2007 în urma unui studiu descoperă că specia prezintă, de asemenea, unele proprietăți antifungice care sunt influențate de disponibilitatea azotului în mediu.

Bacillus amyloliquefaciens este o specie de bacterie din genul Bacillus care este sursa enzimei de restricție BamH1. De asemenea, sintetizează o barnază proteică naturală a antibioticilor, o ribonuclează bine studiată, care formează un complex bine cunoscut, cu barstar inhibitor intracelular și plantazolicin, un antibiotic cu activitate selectivă împotriva lui Bacillus anthracis.

B. amyloliquefaciens a fost descoperit în sol 1943 de către un om de știință japonez numit Fukumoto, care a dat numele bacteriei, deoarece a produs (faciens) o alfa amilază (amylase). Alfa amilaza din B. amyloliquefaciens este adesea utilizată în hidroliza amidonului. Este, de asemenea, o sursă de subtilizină, care catalizează destrămarea proteinelor într-un mod similar cu cea a tripsinei.

B. amyloliquefaciens este considerată o bacterie de colonizare a rădăcinilor și este folosită pentru combaterea unor agenți patogeni ai rădăcinilor de plante în agricultură, acvacultură și hidroponie.

Wu, Liming; et. Al., 2014 demonstrat că asigură beneficii atât plantelor, cât și aplicațiilor hidroponice. Tot ei au demonstrate că acționează împotriva agenților bacterieni și a agenților patogeni fungibili și poate preveni infectarea prin excluziune competitivă sau în afara concurenței cu agentul patogen nedorit.

Tan, Shiyong et.al, 2015 au dovedit eficacitatea acestei bacterii împotriva mai multor agenți patogeni care scad randamentele agricole din sol și hidroponie, cum ar fi Ralstonia solanacearum în tomate, Rhizoctonia solani în salată, Pythium în tomate Alternaria tenuissima la iedera engleză și Fusarium în banane și castraveți. De asemenea, se pare că ameliorează toleranța rădăcinilor împotriva stresului abiotic, permițând plantelor cum ar fi porumbul să tolereze concentrații mari de sare în aplicații hidroponice, reducând, de asemenea, concentrațiile de sare din țesutul vegetal

Între anii 1940 și 1980, bacteriologii au dezbătut dacă B. amyloliquefaciens este sau nu o specie separată sau o subspecie de Bacillus subtilis. Problema a fost rezolvată în 1987: a fost stabilită pentru a fi o specie separată.

În colecția americană de culturi de tip, numărul pentru B. amyloliquefaciens este 23350.

Soumitra Paul Chowdhury et.al în 2015 în urma unor cercetări ample au studiat B. amyloliquefaciens FZB42ca producătorul de plantazolicin cu spectru ultra-îngust, și a fost reclasificat în 2015 ca B. velezensis NRRL B-41580T (împreună cu B. metilotrophicus KACC 13015 T și B. oryzicola KACC 18228) pe baza coerenței fenotipului și genotipului.

Bacillus amyloliquefaciens FZB42 este un rhizobacterium care p gram-pozitiv, suprimând patogenii și ajutând creșterea plantelor. S-a demonstrat recent că FZB42 marcat cu GFP a reușit să colonizeze rădăcinile a trei genuri de plante diferite. În afară de această capacitate, acesta produce o gamă largă de metaboliți secundari, care includ atât fluxurile ribozomale, cât și cele ne-ribozomale. Amilociclicina A și plantazolicina sunt antimicrobieni sintetizați cu ribozom prin FZB42 care au fost recent identificați.

În cazul peptidelor ne-ribosomale sintetizate, cinci grupuri de gene (srf, bmy, fen, nrs și dhb) direcționează biosinteza lipopeptidelor și alte trei clustere genice (mln, bae și dfn) sunt implicate în sinteza antibacterianelor poliketide. În plus, o bacilizină anti-biotică dipeptidă este codificată de un singur operon (bacABCDE) împreună cu genele adiacente, ywfGH. Este un antibiotic peptidic simplu compus din L-alanină și L-anticapsin ca coloană vertebrală moleculară.

2.4. MECANISME DE ACȚIUNE A MICROORGANISMELOR ANTAGONISTE

Microorganismele antagoniste existente în sol sau pe plante, intră în competiție prin ocuparea mediului, consumarea substratului nutritiv sau prin invadarea rapidă a spațiului. Orice modificare în compoziția solului, orice variație a umidității, temperaturii sau pH-ului, poate influența relațiile de antagonism stabilite între organismele din sol sau de pe suprafețele foliare.

Studiile efectuate asupra patogenilor au scos în evidență că fiecare dintre aceștia pot avea un antagonist sau o grupă de antagoniști care pot să le anihileze posibilitățile de parazitare.

Mecanismele de acțiune ale microorganismelor antagoniste se manifestă sub următoarele forme:

1. Antagonismul (amensalismul) bacterian este dat de relația între două sau mai multe specii de microorganisme aflate într-o asociație în care o specie exercită o acțiune defavorabilă asupra celorlalte.

Antagonismul poate fi specific și nespecific.

Antagonismul nespecific se manifestă în cazurile cînd efectul dăunător se răsfrînge asupra oricărei specii de microorganisme care vine în contact direct cu specia agresor sau cu metaboliții ei. Acest tip al antagonismului bacterian se poate realiza prin două mecanisme:

modificarea biochimică a mediului în urma acumulării produselor metabolice nocive pentru speciile asociate ca de exemplu: alcooli, acizii lactic, butiric, acetic etc.

competiția pentru o anumită substanță nutritivă prezentă în mediu în cantități limitate. Această relație apare între două specii care au aceleași necesități dar un ritm diferit de reproducere. Specia cu o viteza mai mare de creștere epuizează substanțele nutritive disponibile astfel împiedicînd dezvoltarea speciei cu o viteza mai mică de creștere. În consecință specia agresor domină numeric sau elimină totalmente specia victimă.

Antagonismul specific se manifestă în cazurile cînd acțiunea negativă a metaboliților agresorilor este selectivă. Metaboliții cu acțiune defavorabilă selectivă sunt numiți antibiotice.

2. Antagonismul prin bacteriocine. În 1925 Gratia a descris un tip particular de antagonism absolut specific între două tulpini diferite de E.coli. Acest antagonism era exercitat prin intermediul a una sau mai multe subsatnțe antibiotice, termostabile, numite în 1964 colicine. Substanțe cu proprietăți similare au fost găsite și la alte specii și tulpini de bacterii, ele au fost numite bacteriocine (Jacob, Lwoff, Siminovitch, Wolman). Bacteriocinele unei specii sunt denumite în raport cu specia care le produce: piocine (Pseudomonas aeruginosa), megacine (B.megaterium) pesticine (Pasteurella pestis), subtilicine (B.subtilits).

Mecanismul acțiunii bacteriocinelor este următorul: inițial ele se fixează pe suprafața bacteriilor sensibile, la nivelul unor receptori specifici, după care, printr-un proces pînă la momentul de față necunoscut (probabil enzimatic) cauzează moartea celulelor. Fixarea “particulelor” bacteriocine pe bacterii are ca urmare apariția unor modificări metabolice esențiale ca: diminuarea biosintezei AND și ARN.

3. Nișa ecologică reprezintă condițiile de existență ale unei specii într-un ecosistem, fără a fi perturbată, concurată, de alte specii. Acest lucru se poate datora faptului că celelalte specii nu consumă aceeași hrană cu specia în cauză sau că nu interferează în privința teritoriului, având alte obiceiuri. Dacă într-un ecosistem există o nișă liberă, neocupată de vre-o populație, aceasta se va ocupa mai devreme sau mai târziu, fie prin evoluția populațiilor existente, fie prin imigrare din alte ecosisteme.

Microorganismele pot prezenta poate cele trei niveluri trofice posibile, fiind producenți (sinteza de novo a substanțelor organice), consumenți și reducenți (descompun substanța organică în substanțe minerale).

4. Aplicarea mijloacelor biologice de combatere. Metoda urmărește distrugerea patogenilor sau micșorarea frecvenței acestora cu ajutorul hiperparaziților sau antagoniștilor din diferite categorii. În prezent este mai extinsă folosirea biopreparatelor produse din diferite grupe de microorganisme, care acționează ca antagoniste față de diferiți agenți fitopatogeni (ciuperci, bacterii, virusuri).

Acest mecanism al antagonismului microbian este influențat de următorii factori; concurența populațiilor privind spațiul, hrana, lumina, principalul factor fiind însă acțiunea unor substanțe metabolice toxice secretate de microorganismele antagoniste.

Cel mai larg spectru de acțiune antagonistă îl prezintă ciuperca Trichoderma viridae pers. et Fr., în cazul căreia literatura menționează că peste 80 de ciuperci fitopatogene sunt inhibate în activitatea lor. Față de ciuperca Rhizoctonia solani, manifestă antagonism unele specii din genul Penicillium și Aspergillus. Față de Fusarium roseum s-a dovedit antagonist specia de bacterie Bacillus subtilis și ciuperca Chaetomium globosum etc.

3. CERCETĂRI ROMÂNEȘTI ÎN DOMENIU

Tatiana Seșan, M. Pîrvu și alții, au evidențiat efectul antagonist și chiar hiperparazitismul ciupercii Trichoderma viride față de unii patogeni ca, Armilariella mellea, Botrytis cinerea, B. paeoniae, B. tulipae etc..

Camelia Filofteia Diguță și colaboratorii în 2015 dintr-un total de 85 de tulpini microbiene (70 tulpini fungice și 15 tulpini bacteriene) izolate din la flora naturală epifitică a strugurilor provenind de la trei podgorii românești au fost evaluate într-o examinare preliminară pentru proprietățile lor antagoniste împotriva Aspergillus carbonarius, Botrytis cinerea, Penicillium expansum și Fusarium oxysporum. Din acestea au selectat și izolat două bacterii (FRI11V și FRI19V) pentru inhibarea creșterii mieliei și pentru activitatea de antisporulare a acestor ciuperci filamentoase. În plus, aceste bacterii izolate au fost evaluate în vivo pe fructele de struguri atacate de Fetească Regală pentru a reduce incidența degradării strugurilor cauzată de A. carbonarius, B. cinerea și P. expansum. Inhibiția ridicată a A. carbonarius și B. cinerea a variat între 75 și 80% în toate probele tratate cu bacteriile izolate selectate. Cu toate acestea, nu s-a observat nici un efect de inhibare în cazul lui P. expansum.

Sîrbu Tamara, Bîrița Cristina, 2014 în rezultatul screeningului efectuat din 40 tulpini de micromicete din genul Penicillium, după proprietățile antifungice față de 10 fitopatogeni s-a demonstrat, că 22 dintre acestea manifestă activitate antifungică. Un potențial mai înalt al activității antifungice a fost înregistrat la 2 tulpini: Penicillium sp.32 și Penicillium sp. 62, care manifestă antagonism față de 9 din 10 fitopatogeni testați. Diametrul zonei de inhibiție a creșterii fitopatogenilor B. cinerea, Sc. sclerotioru și Rh. solani de către aceste tulpini, variază între 20-28 mm, iar față de F.oxysporum și F.solani – 35-38 mm. Un antagonism mai evidențiat au manifestat tulpinile de Penicillium față de Alternaria alternata, Fusarium solani și Fusarium oxysporum Tulpinile fungice Penicillium sp. 32 și Penicillium sp. 62, ce manifestă antagonism față de un spectru larg de fitopatogeni, au fost selectate pentru cercetările ulterioare ca potențiali producători de substanțe bioactive cu acțiune antifungică.

Artiomov Laurenția, 2010 afirmă că folosirea culturii de Candida sake în asociere cu molibdenatul de amoniu elimină totalmente putregaiul albastru al perelor și reduce cu 80% incidența lui la mere în timpul păstrării în stare refrigerată. Bioeficiența culturii de Pseudomomas syringae în controlul antracnozei a fost majorată prin adăugarea dozelor mici de tiobendazol sau imazalil (250 μg ml−1), efectul fiind similar cu cel al dozelor mari de fungicide. Cercetătorii Conway. W.S. ș.a. au inoculat merele Golden Delicious cu Penicillium expansum și le-au tratat cu diferite combinații de bicarbonat de sodiu și 2 antagoniști ai Penicillium expansum (Metschnikowia pulcherrima, Cryptococcus laurentii), apoi le-au păstrat în atmosferă obișnuită sau controlată (CA=1,4 k Pa O2 and 3 kPa CO2) la 1°C pentru 2 sau 4 luni. Doar tratarea cu bicarbonat de sodiu în asociere cu ambii antagoniști și păstrarea lor în stare refrigerată și în atmosferă controlată au eliminat putregaiul cauzat de Penicillium expansum. Nizina, un antibiotic natural de origine polipeptidică, intensifică acțiunea antimicotică a drojdiei Candida oleophila în cazul fructelor de mere afectate de Botrytis cinerea și Penicillium expansium.

În cazul speciei Candida saitoana s-a constatat că activitatea sa de biocontrol al dezvoltării pe mere a fungilor fitopatogeni Botrytis cinerea și Penicillium expansum se bazează pe mecanismul de inducere a formării structurilor anatomice de protecție. Astfel, se previne creșterea necrotrofă a hifelor ciupercilor (El-Ghaouth, 1998).

La nivel internațional se folosesc antagoniști ca Debaryomyces hansenii Lodder & Krejer-van Rij, Cryptococcus laurentii Kufferath & Skinner, Bacillus subtilis (Ehrenberg) Cohn, Trichoderma harzianum Rifai. Au fost elaborate și înregistrate produse de biocontrol ca Aspire, BioSave, Shemer etc. Deși rezultatele acestor tehnologii sunt încurajatoare, sunt necesare cercetări suplimentare.

Maria Pamfil, M. Moscovici și colaboratorii, 2015 au efectuat un studio în care pentru a obține antagoniști microbieni, s-au izolat zece tulpini de bacterii. Izolarea tulpinilor a fost făcută din natură:plante medicinale, buruieni etc. Au fost selectate patru tulpini de Bacillus subtilis, care a avut un puternic efect antagonist asupra bacteriilor patogene (50-80%) după testele efectuate pe viță și legume. Tulpinile care au o rata ridicată de spumare, deoarece sporul are capacitatea de a elibera antibacteriene substanțe lipoproteinice cu funcție antibiotică. Efectul microbian fost studiate în laborator împotriva unor tulpini de Ervinia carotovora, Xanthomonas campestris, Xanthomonas phaseoli, Agrobacterium tumefaciens, etc. Antagoniștii obținuți din microbieni culturile de Bacillus subtilis au un avantaj important de a avea și rolul ca biostimulatori pe plante.

S-a cercetat obținerea de bioproduse cu ajutorul bacteriilor de tipul Bacillus care sa poatā fi utilizate în agricultura ecologicā pentru combaterea bacteriilor patogene care atacā plantele de culturā, în special vița de vie și plantele legumicole.

Bioprodusele se obțin prin fermentație submersā și aerare corespunzatoare necesarā unei sporulari cât mai mari a bacteriilor în lucru de Bacillus subtilis.

Produsele obtinuțe sub forma de pulberi atomizate și mediile de culturā finale au fost testate pe vița de vie pentru combaterea cancerului produs de Agrobacterium tumefaciens și pe legume – vinete și tomate – atacate de bacterii din genul Erwinia carotovora, Pseudomonas syringae și Xanthomonas campestris.

Procentul de combatere la nivel laborator a fost de 85-95%, comparabil cu un antibiotic clasic și fațā de martorul tratat chimic cu sulfat de cupru 1%, tratament recomandat în mod obișnuit de practica agricolā în legumiculturā, unde eficacitatea a fost de 73-80%.

Biopesticidele au manifestat și un efect biostimulator asupra plantelor legumicole, dând un aspect viguros, stimulând efectul de rezistențā fațā de pathogen.

BIBLIOGRAFIE

1. Quistorp-Santos, B.A., Obed-Ntwampe, S.K., Doughari, J.H., 2013. Biotehnologia continuă tratarea apelor contaminate cu cianură prin utilizarea unei specii rezistente la cianură de Aspergillus awamori. In: Petre, M. (Ed.), Biochimie, Genetică și Biologie Moleculară. Biotehnologia mediului – noi abordări și aplicații prospective. INTECH

2. Dimitrios I. Tsitsigiannis, Myrto Dimakopoulou, Polymnia P. Antoniou and Eleftherios C. Tjamos./Laboratory of Plant Pathology, Department of Crop Science, Agricultural University of Athens, Athens, Greece.Biological control strategies of mycotoxigenic fungi and associated mycotoxins in Mediterranean basin crops, Published on: 10/28/2016

3. Preot, F., Goodfellow, M., Shute, L., și Berkeley, R. 1987. "Bacillus amyloliquefaciens sp. Nom.,Rev.Jurnalul Internațional de Bacteriologie Sytematică. 37: 69-71. http://ijs.sgmjournals.org/content/37/1/69.full.pdf

4. Roberts, R., Wilson, G. și Young, F. 1977. "Secvența de recunoaștere a endonucleazei specifice BamHI din Bacillus amyloliquefacienss H". Natură. 265: 82-84. http://www.nature.com/nature/journal/v265/n5589/abs/265082a0.html

5. Caldeira A. et. Al. 2007. "Dinamica de mediu a activității antifungice CCMI 1051 a lui Bacillus amyloquefaciens în diferite modele de azot". Journal of Applied Microbiology. 104: 806-816.http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1365-2672.2007.03601.x/abstract;jsessionid =0A5A7A16B5CD48BB1390526B984CCFC7.d03t01

2. Tan, Shiyong, Gu, Yian, Yang, Chunlan, Dong Yue, Mei, Xinlan, Shen, Qirong ;. Xu, Yangchun (2015-11-21) „Bacillus amyloliquefaciens T-5 poate preveni infecția cu Ralstonia solanacearum prin competitive Excluderea ", Biologie și fertilitatea solurilor, 52 (3): 341-351.

3. Huang, Jianfeng, Wei, Zhong, Tan, Shiyong, Mei, Xinlan, Shen, Qirong, Xu, Yangchun (2014-11-05) „Suprimarea bacteriene Wilt de tomate de Bioorganic tuc Fabricat din tulpina Producerea compusului Antibacterian. Bacillus amyloliquefaciens HR62 „Journal of agricole si chimie alimentara 62 (44): .. 10,708-10,716 doi: .. 10.1021 / jf503136a ISSN 0,021-8,561 PMID 25322261 ..

4. zouari, Imen; Jlaiel, Lobna; Tounsi, Slim, Trigui, Mohamed (2016-09-01) "Activitatea Biocontrol a Bacillus amyloliquefaciens endophytic tulpina CEIZ-11 împotriva Pythium aphanidermatum și purificarea compușilor săi bioactivi" Controlul biologic .. 100: 54-62. Doi: 10.1016 / j.biocontrol.2016.05.012.

Grube, Martin, Schloter, Michael, Smalla, Kornelia, Berg, Gabriele (2015-01-22), microbiomul plantei și importanța sa pentru sănătatea plantelor și a oamenilor. .

6.Soares, Marcos Antônio, Li, Hai-Yan, Bergen, Marshall, Silva, Joaquim Manoel da ;. Kowalski, Kurt P,. Alb, James Francis (2015-08-22) „Rolul funcțională a unui Bacillus amyloliquefaciens endophytic în .. creștere și sporirea gradului de protecție a bolilor invazive iedera English (Hedera helix L.) „Plant și sol 405 (1-2): 107-123 doi :. 10.1007 / s11104-015-2638-7 ISSN 0032-079X ..

7. Shen, Zongzhuan, Wang, Beibei, Lv, Nana, Sun, Yifei, Jiang, Xinyi, Li Rong, Ruan, Yunze ;. Shen, Qirong (2015-06-03) „Efectul combinației bio-organice îngrășământ cu Bacillus amyloliquefaciens NJN-6 privind controlul bolilor ofilirii banana Fusarium, producția vegetală și banane rizosferă microflora culturable „Biocontrol Science and Technology 25 (6): .. 716-731 doi :. 10.1080 / 09583157.2015.1010482 ISSN 0958-. 3157.

8. Liu, Yunpeng, Zhang, Nan, Qiu, Meihua, Feng, Haichao; Vivanco, Jorge M;. Shen, Qirong ;. Zhang, Ruifu (2014-04-01) „îmbunătățită colonizare rizosferă Bacillus benefice amyloliquefaciens SQR9 prin patogen infecție „FEMS Microbiology Letters 353 (1): 49-56 doi :. 10.1111 / 1574-6,968.12406 ISSN 1574 – 6968 ..

9. Chen, Lin, Liu, Yunpeng, Wu, Gengwei; Veronican Njeri, Kimani, Shen, Qirong, Zhang, Nan ;. Zhang, Ruifu (2016-09-01) „indusă de porumb toleranță sare prin rizosferă inoculare de Bacillus amyloliquefaciens SQR9 .. „Physiologia Plantarum 158 (1): 34-44 doi:. 10.1111 / ppl.12441 ISSN 1399-3054 ..

12. Wu, cenușărire, Wu, Huijun, Chen, Lina, Lin, Ling, Borriss, Rainer, Gao, Xuewen (2014-12-04) "supraproducție Bacilysin în Bacillus amyloliquefaciens FZB42 markerless tulpini derivate FZBREP și FZBSPA intensifică activitatea antibacteriană". . Microbiologie Aplicata si Biotehnologie 99 (10) :. 4255-4263 doi: … 10.1007 / s00253-014-6251-0 ISSN 0175-7598 PMID 25472439.

13. Tan, Shiyong, Jiang, Yi, Song, Song, Huang, Jianfeng, Ling, Ning, Xu, Yangchun ;. Shen, Qirong (2013-01-01) „Două Bacillus amyloliquefaciens tulpini izolate folosind tomate competitiv metoda de îmbogățire a rădăcinii și efectele lor asupra suprimarea Ralstonia solanacearum și promovarea tomate plantelor de creștere „Crop Protection 43: .. 134-140 doi :. 10.1016 / j.cropro.2012.08.003.

14. (Kinay și colab., 2001; Papadopoulou-Mourkidou, 1991; Usall și colab., 2001; Zhou și colab., 2002).

15. CAMELIA FILOFTEIA DIGUȚĂ*, FLORENTINA MATEI, CĂLINA PETRUȚA CORNEA Biocontrol perspectives of Aspergillus carbonarius, Botrytis cinerea and Pencillium expansum on grapes using epiphytic bacteria isolated from Romanian vineyards, October 18, 2015)

16. Sîrbu Tamara, Bîrița Cristina, ACTIVITATEA ANTIFUNGICĂ A UNOR TULPINI DIN GENUL PENICILLIUM, Buletinul AȘM. Științele vieții. Nr. 2(323) 2014, Microbiologia și Biotehnologia)

17. Artiomov Laurenția, dr., conf. univ., Universitatea Cooperatist-Comercială din Moldova, CONTROLUL BILOLOGIC AL FUNGILOR FITOPATOGENI ÎN CONTEXTUL ASIGURĂRII INOCUITĂȚII PRODUSELOR HORTICOLE

18. Maria PAMFIL, M. MOSCOVICI, Tudora CARAIANI, Gabriela SÃVOIU, Amalia ȘTEFANIU, Maria OPREA,, CONTROLUL BIOLOGIC AL BACTERIILOR PATOGENE CARE ATACA PLANTELE DE CULTURA, Lucrări Științifice – vol. 51, seria Agronomie.