Specii Bacillus

PARTEA I

ETIOLOGIE

1.1. Prezentarea genulul Bacilul

Specii Bacillus sunt folosite în multe medicale, farmaceutice, agricole, precum și procese industriale care profita datorita gamei largi de caracteristici fiziologice și capacitatea lor de a produce o serie de enzime, antibiotice, și alți metaboliți. Bacitracină și polimixină sunt două antibiotice cunoscute obținute din specii Bacillus. Mai multe specii sunt utilizate ca standarde în teste medicale și farmaceutice.

Sporii obligatorii termofil Bacillus stearothermophilus sunt folosite pentru a testa procedurile de sterilizare termică, și Bacillus subtilis ssp globigii, care este rezistent la căldură, substanțe chimice, și radiații, este utilizat pe scară largă pentru a valida proceduri alternative de sterilizare și fumigare. Anumite specii de Bacillus sunt importante în degradarea naturală sau artificială de deseuri. Unele agenții patogeni Bacillus insecte sunt utilizate ca ingrediente active ale insecticide.

Deoarece sporii de multe specii de Bacillus sunt rezistente la căldură, radiații, dezinfectante, și desicare, ele sunt dificil de eliminat din materiale medicale și farmaceutice și sunt o cauză frecventă de contaminare. Specii Bacillus sunt bine cunoscute în industria alimentară ca organisme dăunătoare supărătoare. (Turnbull PCB, Kramer JM)

Bacilus anthracis, cunoscut sub denumire de bacilul antraxului sau bacilul cărbunos este factorul patogen ce determină antraxul. Aparține genului Bacillus, specia Bacilul anthracis, familia Bacillaceae, ordin Bacillales, clasa Bacilli, încrengatura Firmicutes, regn Bacteria, fiind o bacterie gram pozitivă.Specii Bacillus sunt spori aerobi, sub formă de bară, care sunt omniprezente in natura.

Bacillus anthracis, agentul antrax, este singurul Bacillus patogen în vertebrate. Bacillus larve, Bacillus lentimorbus, Bacillus popilliae, Bacillus sphaericus, și Bacillus thuringiensis sunt patogeni in grupuri specifice de insecte. Un număr de alte specii, în special Bacillus cereus , sunt ocazional patogeni la oameni si animale, dar marea majoritate a speciilor Bacillus sunt saprofite inofensive ( http://www.ncbi.nlm.nih.gov ).

1.1.1. Caracteristici morfologice

Familia Bacillaceae, constând din bacterii formă de tijă care formează endospori, are două subdiviziuni principale: cele anaerobe generatoare de spori de bacterii din genul Clostridium, și generatoare de spori de bacterii aerobe sau facultativ anaerobe genul Bacillus frecvent cunoscut sub numele de ASB (aerobe spor-purtători). Celulele bacteriene ale culturilor Bacillus sunt Gram pozitive, atunci când sunt tinere, dar la unele specii devin Gram negativ cu inaintarea in varsta( Leppla SH)

Cele mai multe specii de Bacillus sunt saprofite. Nu numai ca sunt Bacillus endospori rezistente la condițiile fizice și chimice ostile, dar de asemenea, diferite specii au proprietăți fiziologice neobișnuite care să le permită să supraviețuiască sau să prospere în medii dure, variînd de la nisipuri deșertului și izvoare termale, la solurile arctice și de la apele dulci, la sedimente marine. Genul cuprinde termofile, psihrofil, acidophilic, alkaliphilic, halotolerant, precum și reprezentanți halofile, care sunt capabile de a crește la temperaturi, valorile pH-ului, și concentrațiile de sare la care puține alte organisme ar putea supraviețui.

Un spor este produsă pe celule vegetative. Protoplast centrală, sau celula germeni, poartă elementele constitutive ale viitorului celulei vegetative, însoțite de acidul dipicolinic, care este esențială pentru rezistența termică a sporului. Incadrand protoplast este un cortexul format în mare parte din peptidoglican (murein), care este de asemenea important în rezistența la căldură și radiații de sporul. Stratul interior, membrana cortical sau peretele de protoplaști, devine peretelui celular al noului celulei vegetative când germinează spori. Straturi de spori, care constituie până la 50 la sută din volumul sporilor, protejează-l de chimicale, enzime, etc. Evenimentele implicate în sporularea celule vegetative și în germinarea sporilor sunt complexe și sunt influențate de factori precum temperatura, pH-ul, și disponibilitatea unor cationi bivalenți și compuși de carbon și care conțin azot. Sporii formate în condiții diferite au diferite stabilități și grade de rezistență la căldură, radiații, substanțe chimice, uscare, și alte condiții ostile(http://www.ncbi.nlm.nih.gov ).

1.1.2. Caracteristici microbologice

Bacillus anthracis face parte din genul Bacillus, gen ce cuprinde 48 de specii, caracterizate prin faptul ca au dimensiuni mari, grupandu-se frecvent in lanturi, formeaza spori centrali sau subterminali, si se cultiva pe medii simple. O singura specie, B. Anthracis, este patogena pentru numeroase animale si pentru om. Unele specii, ca B. Cereus si B. Subtilis pot cauza uneori infectii umane (meningite, pneumonii, toxiinfectii alimentare).Majoritatea speciilor genului sunt saprofite, larg raspandite in natura (sol, apa, alimente, materii fecale, tegumente, plante, praf, balegar, namol, etc)(http://www.zooland.ro).

Agentul antraxului este un bacil imobil, cu dimensiuni relativ mari, avand 3-15 microni lungime si 2 microni latime, cu capetele „taiate” drept, Gram pozitiv.In conditii favorabile sporogenezei prezinta un spor central sau subterminal, cu diametrul mai mic decat grosimea bacteriei.

In produsele patologice bacilii sunt incapsulati, nesporulati, dispusi fie izolati fie in lanturi scurte. Ca urmare a fixarii bacililor capetele lor devin usor concave, lantul imitand trestia de bambus( http://www.zooland.ro).

Sporogeneza are loc doar in prezenta oxigenului, pe medii de cultura sau in cadavrele deschise, etc.

Prin coloratiile uzuale, sporii nu se coloreaza, ei apar sub forma unei vacuole ovalare in corpul colorat al formei vegetative. Prin metode speciale, prin metoda cu verde malachit, sporii se coloreaza in verde.

Boala afecteaza de obicei animalele ierbivore iar oamenii sunt gazde accidentale.Animalele prezinta edem al gatului si faringelui cu aparitia edemului glotic si moartea prin asfixie si toxemie; sangerari prin orificiile naturale, febra(http://www.creeaza.com ).

Bacillus anthracis gram pozitiv mare, aerobic, sporogen cu diametru 1-1,5 x 3-10 pm, este singurul patogen în genul bacillus. Spre deosebire de ceilalți membri ai grupului B. cereus, B. anthracis este non-motile și non-hemolitice pe cal (sau de oaie) pe agar de sânge, crește la 37 ° C, si formeaza colonii tipice albe cu aspect ochi de albine (care este, de formă ovală, ușor granular dar nu uscat, de aproximativ 2 mm în diametru), care sunt în mod caracteristic lipicios pe teasing cu o buclă. (http://www.ncbi.nlm.nih.gov)

Sporii nu formează în țesuturile gazdă, cu excepția cazului în fluidele corporale infectate sunt expuse la aer. Când nutrienți sunt epuizate, spori rezistenți la forma care poate supraviețui în sol pentru decades. Acești spori germinează atunci când sunt expuse la un mediu bogat nutritiv, cum ar fi țesuturi sau sângele unui animal sau gazda umana.

În sânge sau țesuturi infectate, bacilii sunt adesea prezente în lanțuri scurte, înconjurat de capsula polipeptide, care pot fi vizualizate sub microscop dacă colorate cu albastru de metilen policrom (McFadyean pata) sau a subliniat cu tuș.

În frotiul colorat din coloniile cultivate pe plăci nu există nici o capsulă cu excepția cazului în mediul conține 0,7% biocarbonat sau 5% ser și plăcile sunt incubate în 5-10% dioxid de carbon . Cu toate acestea, în prelevarea de probe de mediu din cauza prezenței altor Bacillus spp, se recomandă un mediu selectiv, cum ar fi polimixină lizozim EDTA (http://www.ncbi.nlm.nih.gov) .

1.1.3.Condiții de creștere si caracteristicile culturi

Aerob, se dezvolta cu usurinta pe mediile uzuale, la un optimum de temperatura de 35-38 grade Celsius. Prin crestere in bulion, formeaza flocoane cu depozit pe peretii eprubetei, lasand mediul limpede. Pe geloza simpla sau geloza sange, tulpinile virulente dezvolta colonii rotunde, opace, cu suprafata rugoasa, marginile neregulate; au aspectul unei impletituri de filamente ”cap de meduza”, ”coama de leu”, caractere de cultura”rough”. Uneori, datorita capsulei pot avea caracter mucos (http://www.creeaza.com).

Mai multe medii neselective și selective pentru detectarea și izolarea Bacillus anthracis au fost descrise, precum și un test rapid de screening pentru bacteria pe baza morfologiei microcolonii( http://textbookofbacteriology.net).

1.2.Rezistenta antraxului la acțiunea factorilor de mediu.

Bacillus, care se prezintă sub formă vegetativă este instabilă. Astfel, la animale moarte nedeschise (cadavre) bastoane sunt inactivate în termen de 1-3 zile. Dezinfectanți convenționale (soluție formol 2%, 5-10% rstvor de cloramină) ucide forme vegetative de bacili în 4-5 minute. În carnea congelată (minus 150 ° C), acestea sunt stocate până la 15 zile. Lumina soarelui le ucide în câteva ore. Bacillus sensibile la antibiotice – penicilina, streptomicina, oxitetraciclina, tetraciclina. Sporii sunt mult formă vegetativă bacili mai rezistent și stocate în mediul extern pentru mai mult timp. În suspensie persista peste 1 an, în sol, în stare uscată, ele pot dura 30-60 de ani sau mai mult viabil și virulent. Litigiile pot atunci când sunt ingerate de sol, care trece stadiu sporoprorastaniya merge într-o fază de celule vegetative și apoi provoca o boala. Sporii sunt rezistente la factori fizici (punct de fierbere timp de 10 minute, lumina soarelui directa – 2-5 zile), produse chimice și dezinfectante (soluție 5-10% din înălbitor, o soluție de 10% de hidroxid de sodiu inactiva spori numai după 2 ore(. http://textbookofbacteriology.net/Anthrax_3.html)

2.Epidmiologie

Antraxul este distribuit pe tot cuprinsul lumii. Toate animalele sunt susceptibile in grade riate, insa boala are prelenta cea mai mare in randul ierbivorelor domestice (incluzand vite, oi, cai si capre) si al ierbivorelor salbatice.(http://www.mediculmeu.com)

Animalele ierbivore se contamineaza atunci cand pasc in zone contaminate cu spori de B. anthracis si in conditii climaterice adecte. La ierbivore antraxul este sever, cu mortalitate crescuta. Animalele cu boala terminala prezinta bacteriemie intensa si prezinta frecvent sangerari la nivelul nasului, gurii sau intestinului, contaminand astfel solul sau locurile de adapat cu forme vegetative de B. anthracis, care ulterior sporuleaza si persista in mediu. Carcasele animalelor infectate constituie un potential focar suplimentar de contaminare. Epidemiile in randul animalelor se pot raspandi de la un focar initial in ariile geografice invecinate dupa un model care se suprapune cu deplasarea animalelor. Mustele sunt, de asemenea, implicate ca vectori in trasmiterea antraxului prin intepaturi, iar vulturii care se hranesc cu carcasele infectate se presupune ca sunt implicati in raspandirea antraxului din zonele contaminate in zonele necontaminate, probabil prin contaminarea surselor de apa de suprafata(http://www.mediculmeu.com)

Rezistenta naturala a oamenilor la antrax este mai mare decat cea a animalelor ierbivore. Este greu de silit incidenta anuala a antraxului uman pe tot cuprinsul lumii, pentru ca multe cazuri nu primesc ingrijire medicala si nu sunt raportate; s-au estimat aproximativ 20.000 pana la 100.000 de cazuri anual. Cazurile umane sunt clasificate in cazuri din industrie si cazuri din agricultura, pe baza cadrului epidemiologie in care apar. Cazurile din agricultura apar cel mai frecvent ca urmare a contactului cu animalele bolnave de antrax (in timpul jupuirii, taierii, disecarii), a intepaturii mustelor infectate sau contaminate si, in cazuri rare, a consumului de carne contaminata. Cazurile din industrie sunt asociate cu expunerea la pielea acita, parul de capra, lana sau oase, toate contaminate. Antraxul la animale este de multa vreme o problema in Iran, Turcia, Pakistan si Sudan, iar probabilitatea este mare ca produsele animale (in special blana de capra) provenite din aceste zone sa fie contaminate cu spori de antrax.(http://www.mediculmeu.com)

In Statele Unite au fost raportate doar trei cazuri de antrax uman intre anii 1984 si 1988, iar antraxul gastrointestinal nu a fost niciodata raportat in aceasta tara. Epidemii mari de antrax au aparut in fosta Uniune Sovietica la Sverdlovsk in 1979 si in Zimbabwe intre anii 1978 si inceputul lui 1980. Initial, cazurile din Sverdlovsk au fost raportate ca fiind antrax cutanat si gastrointestinal si au fost atribuite contactului cu carnea provenind de la animalele infectate. Un intens interes international a fost stimulat de suspiciunea ca B. anthracis care a produs epidemia a fost eliberat de la o baza militara din apropiere. O analiza recenta a 42 necropsii din epidemia de la Sverdlovsk, incluzand majoritatea cazurilor fatale, descrie elementele patologice si dovedeste ca boala a fost de fapt antrax prin inhalare. Epidemia din Zimbabwe a implicat peste 9700 de cazuri de antrax la lucratorii din agricultura. Aceasta izbucnire masi a aparut in timpul razboiului si a fost asociata cu distrugerea infrastructurii medicale si veterinare si incetarea programului de ccinare veterinara impotri antraxului (http://www.mediculmeu.com).

3.PATOGENEZA

Bacilu antraxului este capabil de a traversa tegumentele si mucoasele, patrunde rapid in circulatie, se multiplica usor si poate ucide. Toxina antraxului este principalul factor de virulenta.

Toxina antraxului este formata din trei proteine:

• antigenul protector (imunizant).

• factorul edematiant.

• factorul letal.

Antigenul protector este capabil sa se ataseze la nivelul membranei celulelor tinta, favorizant patrunderea in celula a celorlalti doi factori. Factorul edematiant, favorizeaza aparitia edemului la locul infectiei si inhiba leucocitele polimorfonucleare (PMN-mediatori ai inflamatiei). Factorul letal, odata patruns in celula, determina moartea acesteia.

Leziunile tegumentare faciliteaza patrunderea sporilor in piele, unde vor germina, rezultand formele vegetative ale bacilului ce vor produce toxine. Astfel, vor aparea leziuni de necroza, hemoragie, congestie si edem. Clinic, leziunea are aspect de „pustula maligna”(http://www.romedic.ro).

Atunci cand boala este transmisa pe cale aeriana, sporii, care au un diametru foarte mic, se vor cantona la nivelul alveolelor pulmonare; de aici, pe cale limfatica vor ajunge sa germineze la nivelul ganglionilor mediastinali; rapid se produce necroza hemoragica ganglionara cu mediastinita hemoragica.

Carnea contaminata si insuficient preparata va conduce la aparitia formelor gastrointestinale de antrax. Daca aciditatea sucului gstric nu distruge sporii de bacil, acestia vor germina la nivel intestinal, de unde vor produce limfadenita hemoragica. In unele cazuri bacteria poate produce meningita, prin raspandire pe cale umorala de la un alt focar infectios.

Odata patruns in organism, antraxul se raspandeste rapid in toate organele pe cale limfatica si sanguina, devenind fatal( http://www.romedic.ro )

Bacillus anthracis este un patogen extrace-lular care poate evita fagocitoza, patrunde in circulatie, se multiplica rapid ajungand la o populatie cu densitate crescuta in vivo si ucide usor. Polipeptidul capsular si toxina antraxului sunt recunoscuti ca principalii factori de virulenta ai B. anthracis. Capsula bacilului este constituita din acid poli-D-glutamic si confera rezistenta la fagocitoza. Toxina antraxului consta din trei proteine denumite antigen protector (AP), factor edematiant (FE) si/actor letal (FL). Toxina a fost descoperita prin constatarea ca transferul de sange steril de la cobaii care mureau de antrax la cobaii neinfectati ducea la moartea acestora din urma.

AP se leaga de membranele plasmatice ale celulelor tinta si este scindata de o proteaza celulara in doua fragmente. Fragmentul mai mare ramane la suprafata celulei si reprezinta un situs de legare pentru o secventa care exista atat la FE, cat si la FL si are rol de receptor specific ce mediaza intrarea FE si FL in celula tinta prin endocitoza. FE este o adenil-ciclaza calmodulin-dependenta, activitatea sa desfasurandu-se in celulele umane sau animale, care asigura atat actitorul de calmodulina, cat si substratul ATP pentru FE. Efectele biologice ale FE, care includ formarea edemului in leziunile din antrax si inhibarea functiilor leucocitelor polimorfonu-cleare, sunt mediate de AMP ciclic care se formeaza intracelular prin actiunea enzimatica a FE. Patrunderea FL mediata de AP in celulele susceptibile duce la moartea celulei, dar mecanismul de actiune nu este cunoscut. (http://www.ncbi.nlm.nih.gov)

Antraxul cutanat este declansat de introducerea sporilor de B. anthracis in piele prin taieturi, abraziuni sau intepaturi de insecte. Sporii germineaza in cate ore, iar celulele vegetative se multiplica si produc toxina antraxului. Din punct de vedere histologic, leziunile din antraxul cutanat se caracterizeaza prin necroza, congestie sculara, hemoragie si edem gelatinos. Numarul de leucocite este disproportionat de mic in atie cu amploarea afectarii tisulare. Descrierea clinica a leziunii ca "pustula maligna\" nu este in concordanta cu constatarile patologice.In antraxul produs prin inhalatie, sporii de B. anthracis purtati in aer sub forma de particule cu diametrul sub 5 [im sunt depozitati direct in alveole sau in duetele alveolare. Sporii sunt fagocitati de macro fag ele alveolare, iar unii sunt transportati si germineaza in ganglionii mediastinali. Necroza hemoragica a ganglionilor, in asociere cu mediastinita hemoragica si bacteriemia (importanta) cu B. anthracis, se poate dezvolta rapid. Uneori poate aparea pneumonia secundara(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)

Antraxul gastrointestinal apare de obicei in urma ingestiei de carne insuficient preparata provenind de la animale cu antrax. Infectia primara poate fi initiata in intestin de microorganismele care supravietuiesc pasajului prin stomac, insa a fost descrisa si o forma de boala orofaringiana. Leziunile din faringe si intestin sunt insotite de obicei de limfadenita hemoragica.Bacteriemia cu B. anthracis poate aparea in toate formele de antrax si este documentata in aproape toate cazurile fatale. Autopsiile rele un numar mare de bacterii in sele sanguine, ganglioni limfatici si in multe organe(http://www.mediculmeu.com).

Boală se manifestă adesea sub forma de septica fluxurilor instantaneu și puternic cu înfrângerea de intestin și fenomenele de septicemie. Dar poate o manifestare atipică a bolii. Când animal fulminantă poate muri subit fără semne clinice. În cazul în care boala este oarecum întârziată, atunci există unele semne clinice. Există o agitație puternică, creșterea temperaturii corpului, puls accelerat, respirație profundă cianotic mucoase, vizibil. De obicei, animalele sunt ucise în termen de câteva minute după primele simptome în timpul unei crize convulsive severe. Fluxul de acută este caracterizată prin temperatura corpului ridicată (41-42 C). Febra însoțită de tremuraturi musculare. Pulse 80-100 batai pe minut, inima bătând tremor, respirație rapidă și intermitentă. Animal refuză alimente, a crescut sete. Membranele mucoase cianotice vizibile. Animal deprimat, privirea fixă, confuz. Gura deschisă, limba agățat din gura lui, nările lărgit. Subacută se manifestă aceleași semne clinice ca acută. Diferența este că, cu simptome subacute cresc lent și uneori pot slăbi. În această perioadă, animalele apar sănătos: ei mananca alimente. Cu toate acestea, după câteva ore de starea lor se deterioreaza. Crize de boală ar putea fi repetat de 2-3 ori în ultima aparitie etapă speriat exoftalmie, uite congelate, alimente prins în gură( http://sfaturi-veterinare.com.).

• În forma acuta întâlnita la taurine si cai, boala are o durata mai lunga. Temperatura urca la 40 – 41° si peste 41° si se mentine la acest nivel tot timpul evolutiei bolii, pentru a scadea brusc înainte de moarte.

Caii prezinta colici, taurinele meteorisme, se observa hiperemia mucoaselor, pulsul este filiform, în discordanta cu bataile cordului care sunt puternice, cu sunet metalic, uneori atât de violente, încât pot fi percepute de la distanta.

Discordanta aceasta dintre violenta batailor cordului si pulsul foarte slab, aproape imperceptibil, are importanta în diagnosticul clinic al bolii.

Respiratia este accelerata si se observa tremurari musculare.

Dupa câteva ore, mucoasele devin cianotice, cu echimoze, apare diareea sanguinolenta, hematuria si în cele din urma animalul transpira (este vorba de cal) are tenesme care pot duce chiar pâna la prolaps rectal. Aceasta forma are o durata de 10 – 24 ore si animalul moare în hipotermie si convulsii.

În forma subacuta, semnele clinice sunt în linii generale aceleasi doar ca pot apare perioade de ameliorare urmate de agravari si foarte rar, de vindecari spontane dar de obicei, boala se termina cu moartea în 2 – 7 zile de la debut.

La cai , edemele numite si tumori carbunoase sau carbunculi, apar în regiunile bogate în tesut conjunctiv (regiunea prescapulara, substernala, inguinala, etc.) jenând functiunea membrului respectiv din cauza caracterului lor invadator.

Tumorile carbunoase la cabaline si taurine, apar mai ales în cazul infectiei pe cale cutanata, în timpul pasunatului în locuri umede, împadurite, când transmiterea bolii s-a facut prin intermediul insectelor hematofage. În acest caz este vorba de o leziune primara dar tumoarea carbunoasa poate apare si ca leziune secundara când poarta de intrare a fost alta decât solutiile de continuitate ale pielii( http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)

4.2.bovine

La bovine, uneori apar umflarea și înroșirea pielii pe partea interioară a membrelor pelvine.

Furuncule pot apărea în diferite părți ale corpului și, uneori, ajunge dimensiuni mari. În centrul rubinu țesut necrotic, rezultatul este o rană. Temperatura corpului crește ușor. Formă de angină este, în general, caracterizat printr-o trecere lung. Temperatura corpului a crescut ușor. De obicei afecteaza ganglionii limfatici submandibulare, retrofaringieni și de col uterin. Boala incepe ca o durere în gât. In gâtul este format umflarea. Pielea în gât devine nuanță albastru-roșu. Descoperiți umflarea limbii și palatului dur. Formularul intestinal este însoțit de o tulburare a sistemului digestiv. Ia act în constipatia început, care se înlocuiește cu diaree. Temperatura corpului este mare și a avut loc până la 10 zile. În ciuda prezenței anumitor semne clinice la animale, diagnosticul de antrax numai de simptome clinice este dificil de stabilit, deoarece acestia fulminantă nu exprimă și în acute și subacute similare cu cele ale altor boli. Cea mai rezonabilă antrax suspiciune se întâmplă numai atunci când formularul karbunkuleznoy sau în prezența edemului în formă submandibulare. Cazurile în special complexe în care antrax apare la animale atipic. Ignorarea studii de laborator poate duce la erori atunci când un diagnostic definitiv. Schimbări post-mortem depinde de formele de manifestare și severitatea bolii. Luminos sunt exprimate, mai lent boala apare, cu excepția curs atipice și cronice. Mai ales modificări patologice caracteristice sunt în boala acută și subacută. Fermitatea cadavrului umflat, nu amorțeală sau aveti slab exprimate. Din orificii alocate fluid sângeroase spumos și, uneori, de sânge. Foarte repede, mai ales în timpul verii, vine o descompunere a cadavrului. Țesutului subcutanat pătruns punct de hemoragii și impregnate infiltrare sero-hemoragic gălbui. Musculare de culoare cărămizie, consistență liber. În cavitățile abdominală și toracică, în inima pungă conține cantități mari de lichid roșiatic plin de noroi. În centrul în Epicard sunt hemoragie. Ganglionii limfatici sunt mărite, suculente, pe o reducere de cărămidă roșie-. Splina este mult exagerate (uneori normală), plin cu sânge. Ficat și rinichi a crescut ușor. Aceste culoare roșu-cărămiziu sau cires. Congestionat vezicii urinare, multiple hemoragii peteșiale pe mucoasa. Intestinul subtire este umflat mucoasa, hyperemic. Intestinul gros sunt rareori afectate. Ușor plin cu sânge, edematoasă. Airway mucoasa hyperemic, edematoasă, presarata cu echimoze. Creierul și măduva spinării hyperemic cu hemoragii în creier și membranelor sale( http://sfaturi-veterinare.com).

Forma pulmonara este observata în cazul infectiei pe cale respiratorie. Este mai frecventa la oi, mai rara la porci si mai rara la alte specii. Aceasta forma este observata uneori si la om (boala scarmanatorilor de lâna).

Forma avortata este rar întâlnita. Este observata mai ales lataurinele de rase rustice si batrâne. Se manifesta printr-o simptomatologie stearsa (stare subfebrila, indispozitie, inapetenta ) urmata de vindecare(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)

4.3.ovine si caprine

Forma externa sau cutanata se contacteaza prin zgarieturi, taieturi ale epidermei celor care lucreaza cu pielea netabacita sau lesuri ale animalelor infectate cum ar fi oaia, capra. Se caracterizeaza prin infectii ale pielii expuse in locul respectiv. Aceasta forma a bolii este cea mai usoara si cea mai comuna ( 95 % din cazurile de antrax este cel cutanat). Sporii germineaza, celulele vegetale se multiplica si devine vizibila. Este observata dupa trei zile de la contactare pentru ca atunci apare un fel de cos ce se inflameaza. Dupa cateva zile se extinde si devine negru in centru fara dureri considerabile. La inceput bacteria cauzeaza o mancarime comparabila cu o muscatura de insecta. in jurul zonei se formeaza basicute rosii. Alte simptome pot include febra si frisoane. In cele mai multe cazuri bacteria ramane in interiorul bubei. Daca totusi se raspandesc la cel mai apropiat punct nervos, sau, in cele mai rare cazuri, in sange, bacteria poate cauza o forma de otravire a sangelui care provoaca moartea( http://aidvet.com).

Forma supraacuta, fulgeratoare sau apoplectica este întâlnita la speciile cele mai receptive (oi si capre)

Semnele clinice în aceasta forma sunt de cele mai multe ori trecute cu vederea din cauza rapiditatii cu care se succed si a mortii care se poate produce în 10 – 16 minute

Forma intestinala si pulmonara se manifesta clinic ca si antraxul septicemic acut, cu deosebirea ca predomina semnele determinate de organele afectate(http://aidvet.com)

Forma intestinala este observata mai frecvent la carnasiere si la porc decât la cabaline si taurine si apare în cazul ingerarii unui numar mare de germeni. În aceasta forma pe lânga tulburarile generale deschise se observa la câine si porc vomizari la cai colici iar la rumegatoare meteorisme(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)

4.4. Antraxul la suine

Ureche pe partea unde zăcea corpul, legat cu sfoară în două locuri, aproape de baza si se taie între ligatura. Sear tăiat cu un fier încins. Apoi tăiat urechea este plasat într-o pungă de plastic sigilată și un termos. O autopsie este inacceptabil! În cazul în care o autopsie făcut cu grijă, noduli limfatici, splină și ficat felii, plasat într-o pungi de plastic dublu-sigilate și un termos. De la porcii nu sunt luate probe de sânge. Ca material patologic folosit bucăți de țesut inflamat în zona de edem și ganglionilor limfatici retrofaringieni. Pentru studiul de piei brute de la fiecare piele reușește dimensiune porțiune de 3×3 cm și a pus pe sfoară, marca și dezinfectate în camera de Krupin la 0,7 atm. timp de 1 oră și 45 de minute(Turnbull PCB)

La porci, perioada de incubatie este mai lunga în comparatie cu alte specii de animale.Alterarea starii generale începe de obicei în momentul instalarii septicemiei. Boala evolueaza cu foarte rari exceptii, ca o boala acuta, febrila. Când infectia s-a facut pe cale faringiana, pot apare aici edeme care preceda aparitia tulburarilor generale. (Baillie, L.)

Cand boala dureaza mai mult (durata de ordinul orelor) se observa hipertermie, 41°, (hipertermia preceda de regula aparitia tulburarilor generale) hiperemia mucoaselor, cordul pocnitor metalic, pulsul filiform, respiratia accelerata, dispneica, mersul vaccilant, frisoane, hematurie. În cele din urma, animalul prezinta scurgeri sanguinolente din orificiile naturale, cade în decubit, are contractii musculare, moartea producându-se în 1 – 4 ore de la debut. (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)

La porci, tumorile edematoase apar mai ales în regiunea gloso-faringiana si din aceasta cauza, se numeste glosantrax sau angina carbunoasa.

Tumoarea carbunoasa se prezinta sub forma unei tumefactii de consistenta pastoasa cu caracter edematos si evolutiei navalitoare ajungând în câteva ore la dimensiuni foarte mari.

Aceasta forma poate evolua scurt (2 – 4 zile) sau subacut (5 – 10 zile). În cazul formei anginoase, boala se poate termina cu moartea prin asfixie înaintea septicemiei sau, la porc, poate trece în forma cronica.

Forma cronica se întâlneste de obicei la porc si se manifesta prin simptome dependente de localizarea procesului. În cazul localizarii amigdaliene, sunt afectati si ganglionii regionali si dupa faza acuta cu tulburari locale si generale intense, procesul inflamator regreseaza, starea generala se amelioreaza si evolutia devine subclinica. În cazul formei intestinale cronice, semnele clinice sunt necaracteristice sau lipsesc încât aceasta forma constituie adesea o surpriza de autopsie(Turnbull PCB)

5.1. diagnosticul diferential

Diagnosticul diferențial. Din cauza diversității de forme ale bolii la animale are un număr de semne clinice similare de mnogoie boală cu etiologii infectioase si neinfectioase. În cazul în care diagnosticul este necesar să se excludă pasteureloză, edem malign, înnegrire, iar bradzot enterotoksimiyu ovine, pesta porcină, porcină africană, infektsioonuyu anemie și gripei ecvine, piroplasmozei, faringită etiologie noncontagious, inima dolezni și tractului gastro-intestinal (tympany ruminal acut, colici cai)( http://sfaturi-veterinare.com).

Diagnosticul clinic al antraxului este destul de nesigur din care cauza, se va suspiciona antraxul în toate cazurile de moarte subita sau în caz de edem în regiunea faringiana sau în alte regiuni.

Antraxul se poate confunda:

– la porci, cu forma edematoasa a pasteurelozei;

– la taurine, cu pasteureloza, carbunele emfizematos, piroplasmozele, edemul malign;

– La oi, cu exterotoxiemia anaerob[, piroplasmoza;

– La cal, cu anemia infectioasa forma acut[, pasteureloza, colicile de diverse entiologii; (http://sfaturi-veterinare.com)

5.2 diagnosticul bacteriologic

Ex bacteriologic

Izolarea B anthracis de exemplare vechi sau de animale sau materiale de mediu în curs de examinare în scopuri de sănătate publică este mai dificil, mai ales dacă, așa cum se întâmplă adesea, B cereus sau alte specii de Bacillus sunt prezente în număr substanțial. Specimenul trebuie examinate atât neîncălzit și încălzit la 60 ° C la 65 ° C timp de 15 min cu subculturi atât sânge sau nutrient agar și geloze selective specialitate. Foarte rar poate fi necesar pentru a folosi mouse-ul sau cobai inoculare pentru a izola anthracis B. Până la aproximativ 0,2 ml de specimen (sau un extract apos de specimen) se injectează subcutanat la un șoarece, sau intramuscular sau subcutanat într-un cobai (mai sensibil decât un șoarece); bacilii încapsulate pot fi văzute într-o pată de sânge aspirat din inima animalului la moarte, iar bacteriile sunt imediat observate și izolat din acest sânge. Dacă sunt utilizate probele de sol, animalele ar trebui să fie injectat 24 oră mai devreme, cu tetanos și gangrenă gazoasă antitoxina.

Când un specimen de la un individ suspectat clinic nu a avea randamente antrax un număr substanțial de bacili Gram-pozitive, specimenul trebuie să fie cultivate și testate pentru a determina speciile Bacillus prezente. Incriminarea dintr-o specie de Bacillus ca cauza unei infecții se bazează de obicei pe prezența în număr mare, la locul infecției, în special în absența altor agenți patogeni cunoscuți. Deoarece speciile Bacillus sunt organisme comune de mediu, prezența lor în număr mic, nu este în general considerată semnificativă. Din acest motiv, utilizarea sistemelor selective sau de îmbogățire pentru izolarea speciilor relevante clinic, Bacillus nonanthrax se limitează la doar câteva situații, cum ar fi examinarea a posteriori a fecale câteva zile după un incident de intoxicatii alimentare (timp în care organismul vinovat Bacillus poate fi prezente în numai un număr mic)(http://www.scritub.com/).

Ex cultural

Aerob, se dezvolta cu usurinta pe mediile uzuale, la un optimum de temperatura de 35-38 grade Celsius. Prin crestere in bulion, formeaza flocoane cu depozit pe peretii eprubetei, lasand mediul limpede. Pe geloza simpla sau geloza sange, tulpinile virulente dezvolta colonii rotunde, opace, cu suprafata rugoasa, marginile neregulate; au aspectul unei impletituri de filamente ”cap de meduza”, ”coama de leu”, caractere de cultura”rough”. Uneori, datorita capsulei pot avea caracter mucos (http://www.creeaza.com).

Mai multe medii neselective și selective pentru detectarea și izolarea Bacillus anthracis au fost descrise, precum și un test rapid de screening pentru bacteria pe baza morfologiei microcolonii( http://textbookofbacteriology.net).

Identificarea antigene bacteriene

Antigenul precipitant nu este distrus prin putrefactie si poate fi decelat prin reactia Ascoli-Valenti.Recoltarea probelor pentru laborator se face la cimitirul de animale, putul sec sau crematoriu, spre a se evita raspândirea germenilor. Se iau deasemenea masuri pentru protectia persoanelor care manipuleaza materialul patologic.Examenul de laborator consta în primul rând din examenul fortiurilor colorate cu metoda Giemsa pentru punerea în evidenta a capsulei.Punerea în evidenta a capsulei în frontiurile din sânge si organe, nu prezinta nici o dificultate si se poate face chiar la nivelul si cu mijloacele unui dispensar veterinar. În materialele patologice putrefiate, bacilii se lizeaza dar ramân capsulele goale care pot fi puse în evidenta.

În laboratoare, din materialul patologic se fac însamântari pe medii de cultura obisnuite, în scopul izolarii bacilului. Daca bacilii sunt sporulati si materialul este infectat cu alti germeni, suspensia de organ se încalzeste la 80° pentru a distruge formele vegetative iar culturile se fac în placi, în scopul de a obtine colonii izolate.Examenul serologic se executa prin reactia de seroprecipitare Ascoli-Valenti. Din organe (chiar putrefiate) se fac extrase la cald, prin fierberea unor fragmente în ser fiziologic (în proportie de 1 gr. organe la 5 ml ser fiziologic) timp de 10 minute.Din piei, extractul se face la rece, timp de 48 de ore, în ser fiziologic fenicat 0,5%.Extractele se filtreaza prin vata de azbest pentru a fi perfect limpezi. Serul precipitant se introduce cu o pipeta bine efilata spre a se forma doua straturi distincte. Reactia se socoteste pozitiva daca la nivelul de separare a straturilor, se formeaza un inel tulbure.Extractele de organe, în care precipitinogenul se afla în cantitate prea mica, pot fi îmbogatite prin tratarea lor cu ser precipitant, resuspendarea precipitatului într-un volum mic de ser fizilogic si repunerea în libertate a precipitinogenului prin fierbere (http://www.mediculmeu.com/ ) .

Reactia Ascoli nu este strict specifica. Ea poate fi falsificata prin prezenta în materialul de cercetat (în special în mezeluri, pastrami, carne tocata) a bacililor înruditi antigenic (B.mezentericus, antracoides, subtilis, megaterium, etc.) .

Fiecare dintre procedeele de diagnostic mentionate da un procent oarecare de erori. Astfel, dupa datele serviciului de diagnostic al Institutului Pasteur Bucuresti din anii 1936 – 1940, frotiurile au dat cca. 18% erori, culturile cc. 24% iar reactia Ascoli 15%.Procesul de erori este în functie si de organul examinat. Dintre toate organele, splina da cel mai mic procent de erori.(http://www.mediculmeu.com/)

6.profilaxie si combatere

6.1.profilaxia antrax

6.1.1 profilaxie generala

Există variații considerabile în susceptibilitate genetica la antrax printre specii de animale. Animale rezistente se împart în două grupe: rezistent la stabilirea de antrax, dar sensibile la toxina și rezistente la toxina, dar sensibile la stabilirea bolii. . Nici sursa inoculul (spori sau celule vegetative sau un amestec), nici calea de inoculare (subcutanat, gastro-intestinale, sau prin inhalație) înscrisă.Doza infecțioasă a antraxului este de așteptat să varieze foarte mult pe baza acestor parametri. Animalele care au supravietuit antrax natural dobandite sunt imune la reinfectare. Atacurile a doua sunt extrem de rare. Imunitate permanent la antrax pare să necesite anticorpi atât toxina și polipeptida capsular, dar importanța relativă a celor două tipuri de anticorpi pare să varieze foarte mult în diferite animale (http://textbookofbacteriology.net ).

Deoarece antraxul este de obicei fatal pentru animalele domestice este necesara adoptarea unei strategii preventive pentru protectia animalelor susceptibile prin vaccinari anuale. Aceasta vaccinare se face de obice cu doua-patru saptamani inainte de sezonul epidemiilor. In situatia in care animalele arata simptome de infectie se recomanda tratament cu antibiotice. Se pot adopta si alte masuri pe langa imunizare si tratament. Acestea pot fi carantinarea, inlaturarea lesurilor afectate de antrax, a asternuturilor animalelor bolnave, tinerea sub control a animalelor gunoiere si pastrarea unei igiene impecabile a persoanelor care intra in contact cu animalele afectate de antrax(http://www.zooland.ro).

6.1.2 profilaxie specifica

Se foloseste vaccinul Sterne neincapsulat. Acest vaccin nu este capabil sa infecteze, dar creaza un raspuns imun impotriva antraxului. O singura vaccinare asigura imunizare pe o perioada de aproximativ noua luni. Imunizarea anuala a animalelor este suficienta pentru prevenirea antraxului. Tulpina folosita in vaccinul Sterne nu reprezinta un pericol pentru oameni, iar in acest sens nu sunt necesare masuri specifice de protectie persoanelor care manipuleaza acest vaccin(http://www.zooland.ro)

Vaccinurile compuse din bacili uciși și / sau antigene capsulare nu produc imunitate semnificative. O tulpină toxigenic neîncapsulată a fost folosit în mod eficient în efectivele de animale. Tulpina Sterne de Bacillus anthracis produce cantități subletale a toxinei care induce formarea de anticorpi protectori.

Vaccinul antrax pentru om, care este folosit în SUA, este un preparat de antigen protector recuperat din filtratul de cultură a unei tulpini avirulent, neîncapsulată de Bacillus anthracis, care produce PA timpul de creștere activă. Antrax imunizare constă din trei injecții subcutanate administrată de două săptămâni, urmate în afară de trei injecții subcutanate suplimentare acordate la 6, 12, si 18 luni. Injectii de rapel anuale de vaccin sunt necesare pentru a menține un nivel de protecție de imunitate.

Vaccinul este indicat pentru persoanele care vin în contact la locul de muncă cu piei de animale importate, blanuri, os, carne, lână, păr de animale (în special păr de capră) și peri; și pentru persoanele fizice implicate în activități de diagnostic sau experimentale care le pot aduce în contact cu spori de antrax. În caz contrar, acesta a fost indicat pentru militari în timpul epoca actuală de război biologic.

Vaccinul trebuie administrat numai la persoane sanatoase 18-65 de ani, deoarece până în prezent anchete au fost efectuate exclusiv în această populație. Nu se cunoaște dacă vaccinul antrax poate dăuna fătului, iar femeile gravide nu ar trebui sa fie vaccinate.

Un nou tip de vaccin pasiv la antrax este în prezent la orizont. Acest lucru a fost anuntat recent de R.G. Cristal si colegii sai de la Colegiul Medical al Universității Cornell, în februarie 2005 al revistei, Molecular Therapy. Ei au demonstrat că șoarecii vaccinați cu un adenovirus uman care exprimă un anticorp cu lanț unic direcționat împotriva antigenului de protectie (PA) a devenit imun la antrax în termen de 24 ore de la vaccinare. Acest lucru este mult mai rapid decât este posibil cu vaccinuri cu antrax existente, care sunt un preparat relativ brut de PA.

În prezent, vaccinurile antrax disponibile au utilizare limitată într-un atac de bioterorism, deoarece acestea sunt vaccinurile active, în care doze multiple sunt necesare mai multe luni pentru a obtine imunitate de protectie impotriva antraxului. Vaccinuri pasive, pe de altă parte, să introducă anticorpi pe deplin format direct la corpul și imunitatea este realizat mult mai devreme.La șoarecii care primesc anti-PA vaccin pe bază de adenovirus, anticorpi serici PA-specifice au fost detectabile în 24 de ore. Acești anticorpi au activitate de neutralizare care protejat soareci de la o provocare intravenoasă toxină letală administrată 1-14 zile după vaccinare.

Cristal, și colab imagina un scenariu posibil în care ar putea fi dat atât vaccinul pasivă și activă. Vaccinuri pasive pierde eficacitatea lor destul de rapid în timp, în timp ce vaccinurile active care nu fac. Vaccinul pasiv ar putea oferi protecție, care va dura câteva săptămâni, dar care să asigure o marjă de siguranță pentru dezvoltarea de mai activ, imunitate pe termen lung stimulat de vaccin activ.Imunoterapia pasivă cu astfel de vectori pe bază de adenovirus care exprimă anti-PA anticorp, fie singur, fie în combinație cu antibiotice, poate fi o strategie rapidă, convenabilă și foarte eficace pentru protecția împotriva antraxului sau într-un atac de bioterorism.

De asemenea, în caz de antrax, administrarea concomitentă de vaccin pasiv cu antibiotice poate maximiza utilitatea tratamentului cu antibiotice. Administrarea concomitentă ar contracara efectele toxinei letale, și probabil prelungi intervalul de timp pentru tratament antibiotic eficient și / sau reduce cantitatea de terapia cu antibiotice este necesar (http://textbookofbacteriology.net).

6.2.combaterea antraxului

La toate speciile, antraxul se poate confunda cu congestia sau edemul pulmonar acut, cu hemoragiile cerebrale, insolatia.La stabilirea diagnosticului, trebuie sa se tina cont daca animalele au fost vaccinate contra antraxului si daca în zona respectiva apar bolile cu care antraxul se poate confunda.Lipsa datelor epizootologice îngreuneaza sau uneori, face imposibila stabilirea diagnosticului de antrax, pe animalul în viata.Pentru diferentierea antraxului de piroplasmoza, se fac frotiuri din sângele periferic si se coloreaza cu May-Grunald-Giemsa pentru a se pune în evidenta parazitul. Se va tine cont de asemenea de stricta sezonicitate a piroplasmozei si de prezenta capuselor.Diferentierea antraxului de carbunele emfizematos si edemul malign, se face prin examenul atent al edemului care este crepitant în cazul carbunelui emfizematos si edemului malign.Diferentierea clinica a antraxului de pasteureloza este mai dificila mai ales daca lipsesc datele epizootologice.

Diagnosticul anatomo-patologic nu se face de obicei din cauza interdictiei deschiderii cadavrelor cu suspiciune de antrax.

Diagnosticul de laborator, se face în toate cazurile când se banuieste antraxul. La laborator se trimite de la cadavrul nedeschis, os cu maduva (metacarp, metatars) cu tot cu piele si frotiuri de sânge. Osul se ambaleaza în vata muiata în sublimat 1%0 si stoarsa.Daca suspiciunea de antrax s-a ivit în timpul autopsiei, se va trimite si un fragment de splina ambalat dupa cum s-a mentionat. În cazurile de glosantrax, este obligatorie trimiterea unei portiuni de edem cu ganglionii respectivi. În cazul când nu se gaseste altceva, cadavrul fiind gasit distrus, se trimite o portiune de piele sau portiune de ureche.